老哥俱乐部

培养操作步骤 ：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出
，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时
； 
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中
； 
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片
，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测
。 

下列是产品的订购信息
：

细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控
、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况
，包括活细胞的形态、结构
、生命活动等
。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳
、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下
。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时
，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察
、检测和记录
采用各种研究技术
：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交

、同位素标记等各种仪器设备
。
​
实验要点及说明

：
1．本方法适用于贴壁细胞培养
，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法； 
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃
，并经过铬酸洗液处理
； 
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻； 
4．如果需要更多生长状态一致的细胞
，可以使用较大的培养皿
，但不宜过大
，以避免培养液的浪费和增加污染机率； 
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

细胞培养方法：
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清
，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）
，使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化
；
③1-2min后，显微镜下观察细胞
，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落
，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁
，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止
；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集
，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏

：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀
。
②在1000RPM左右条件下离心4min
，弃上清,加1-2ml培养基吹匀
，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基
。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清
，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后
，显微镜下观察细胞

，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清
，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒
，放入-80℃冰箱
，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

Adenine Sulfate 腺嘌呤硫酸盐 5g  瓶

瑞氏-姬姆萨复合染液 500ml  瓶

Ginsenoside Rb2 人参皂苷Rb2 11021-13-9  20mg

Zeatin 玉米素 5mg  瓶

DL-Selenomethionine DL-硒代蛋氨酸 1g  瓶

Cy5 5 mg  支

G-418 Sulfate 遗传霉素 100mg  支

Ethidium Brmide 溴化乙锭 (EB) 1g  瓶

D301弱碱性乙烯系阴离子树脂 500g  瓶

D-Mannitol D- 250g  瓶

大豆分离蛋白 250g  瓶

醋酸洋红染色液 100ml  瓶

Vero细胞
，绿猴肾细胞规格轴索过度生长抑制因子-B/A抗原Nogo-B/A 0.5mg

一氧化氮合成酶-2多肽抗原NOS-2 peptide 0.5mg

跨膜受体蛋白Notch-1抗原Notch1/MOTC(Neurogenic locus notch homolog protein 1) 0.5mg

还原型辅酶Ⅱ抗原NADPH peptide 0.5mg

促尿钠排泄肽前体C抗原proCNP/NPPC (pro-natriuretic peptide) 0.5mg

神经肽Y1受体抗原NPY1R (neuropeptide Y1 receptor) 0.5mg

神经肽Y受体2（多肽）NPY2R(Neuropeptide Y Receptor Type 2) 0.5mg

醌氧化还原酶抗原NQO1(NAD(P)H:quinone oxidoreductase l) 0.5mg

受体1（多肽）NR1/NMDAR1(N-Methyl-d-Asprtate receptor 1) 0.5mg

受体1抗原NR1/NMDAR1/GLUR1(N-Methyl-d-Asprtate receptor 1) 0.5mg

受体1NR1/NMDAR1 0.5mg