產品名稱 :厭氧消化鏈球菌LAMP試劑盒
產品特點 :厭氧消化鏈球菌LAMP試劑盒上海老哥俱樂部生物相關產品 :洛塞琳Rosarin :428.43C20H28O10 :84954-93-8酸鉀 :214Potassium iodate :2139718 KIO3介子苷Black - - - - - - - :415.48C10H18KNO10S2 :64550-88-5莫林Pi Molin :176.17C9H8N2O2
產品型號 :50次
更新日期 :2021-02-26
訪問次數 :259
50次厭氧消化鏈球菌LAMP試劑盒的詳細資料 :
參數規格:
產品名稱 | 厭氧消化鏈球菌LAMP試劑盒 |
英文名稱 | Lamp kit for anaerobic digestion Streptococcus |
規格 | 50次 |
儲存條件
:
僅用於科研14℃或-20℃樣品收集
、處理及保存方法
1. 血清
:使用不含熱原和內毒素的試管
,操作過程中避免任何細胞刺激
,收集血液後
,3000 轉離心10 分鍾將血清和紅細胞迅速小心地分離
。
2. 血漿
:EDTA
、檸檬酸鹽或肝素抗凝
。3000 轉離心30 分鍾取上清
。
3. 細胞上清液
:3000 轉離心10 分鍾去除顆粒和聚合物
。
4. 組織勻漿
:將組織加入適量生理鹽水搗碎
。3000 轉離心10 分鍾取上清
。
5. 保存
:如果樣本收集後不及時檢測
,請按一次用量分裝
,凍存於-20℃
,避免反複凍融
,在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍。
使用方法:
一
、樣品 DNA 的製備
用自選方法提取 Cps DNA
。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素
。如果不能很好純化樣品 DNA
,後麵的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度
。
二
、製備 Cps 標準曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例
。由於標準品濃度非常高
,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行
,千萬不能汙染樣品或本試劑盒的其他成分)
。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原
,本產品不提供活體病毒做陽性對照
,隻提供沒有傳染性的
、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照
。
1. 標記 6 個離心管
,分別為 6
,5
,4
,3
,2 和 1 號
。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭
,下同)
。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩衝液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注
:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL
,建議每次稀釋 10 倍
,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)
。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得)
,充分震蕩 1 分鍾
,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照
。
5. 換槍頭
,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中
,充分震蕩 1 分鍾
,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭
,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中
,重複上麵的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照
。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步)
,每個樣品做 3 次重複
。PCR 後得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值
,並以之為縱軸,以濃度的對數值為橫軸
,繪製標準曲線
。
檢測步驟
:
一
、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)
、酶混合物(Enzymes MIX)
,冰上融化並振蕩混勻後
,10000rpm離心10s
。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)
,每個測試反應體係配製如下表
:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量
,加入一適當體積潔淨離心管中
,充分混勻
,10000rpm離心10s
,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液
,向每管中加入處理後樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL
,10000rpm瞬時離心10秒
。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內
。
循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號
。報告基團
:設置為FAM
。淬滅基團
:NONE
,請勿選擇ROX參比熒光
。
二苄亞碸 :230.33Two benzyl dimethyl :621-08-9 C14H14OS
環氧丙烷Epoxy propane:58.08 C3H6O :75-56-9
洛塞琳Rosarin :428.43C20H28O10 :84954-93-8
酸鉀 :214Potassium iodate :2139718 KIO3
介子苷Black - - - - - - -:415.48C10H18KNO10S2 :64550-88-5
莫林Pi Molin :176.17C9H8N2O2 :2152-34-3
2-甲氧噻唑 :115.152甲氧噻唑 :14542-13-3 C4H5NOS
異牧荊素Different animal husbandry :432.38C21H20O10 :29702-25-8
5-羥喹喔啉 :146.155- hydroxy quinoxaline :17056-99-4 C8H6N2O
厭氧消化鏈球菌LAMP試劑盒人 RAB27B 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 GRP 基因全長ORF克隆
人 FGF6 基因全長ORF克隆
人 IL20RA / IL20R1 ELISA配對抗體
人 CD177 基因全長ORF克隆
小鼠 STK32B 基因全長ORF克隆
小鼠 CREG / CREG1 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 CDKN2AIPNL 基因全長ORF克隆
食蟹猴 BMP3 基因全長ORF克隆
人 CXCR2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標簽
人 PNLIP 基因全長ORF克隆
小鼠 SLC3A2 / CD98 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
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