老哥俱乐部

参数规格：

储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管
，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆
：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清
。
3. 细胞上清液
：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测
，请按一次用量分装，冻存于-20℃
，避免反复冻融

，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
图2
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素

。如果不能很好纯化样品 DNA
，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二


、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行
，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）
。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照


。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头

，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注
：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL
，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)
，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照
。
5. 换枪头
，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中
，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头
，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中
，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步）
，每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值

，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。 
检测步骤：
一
、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s
。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)

，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s
，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液
，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL

，10000rpm瞬时离心10秒
。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号
。报告基团：设置为FAM。淬灭基团
：NONE


，请勿选择ROX参比荧光
。

三氯钼：202.3Three molybdenum chloride
：13478-18-7 Cl3Mo

噻唑蓝(MTT)Thiazolyl blue (MTT)：414.32 C18H16BrN5S：298-93-1

2,4-双(氯甲)*

：217.132,4- bis (CL) three methyl benzene：1585-17-7 C11H14Cl2

4-(4-二甲乙)喹啉：274.374- (4- two)
：897-55-2 C19H18N2

2-甲并噻唑：149.212- Methylbenzothiazole：120-75-2 C8H7NS

三氯矾四氢络合物：229.41Three alum chloride tetrahydrofuran complex：19559-06-9 C12H24Cl3O3V

异丙硫ISO - C：76.16 C3H8S：75-33-2

异补骨脂素Isopsoralen：186.16C11H6O3
：523-50-2

对溴辛：To Xin Jiben：567/9

血吸虫通用LAMP试剂盒小鼠 MT-ATP6 基因全长ORF克隆

小鼠 MT-ND4L 基因全长ORF克隆

人 Angiopoietin-4 基因全长ORF克隆

人 LGMN 基因全长ORF克隆

甲型流感 H5N1 (A/chicken/India/NIV33487/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全长ORF克隆 (密码子优化)(表达载体)

大鼠 IL13RA1 基因全长ORF克隆

人 PAH 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带HA标签

大鼠 Semaphorin 4D / SEMA4D / CD100 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人 PROS1 / Protein S 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人 E-Selectin / CD62E 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人 BACE1 / ASP2 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

重组小鼠 SCF / C-kit ligand 蛋白 (His 标签)