老哥俱乐部

使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA
。注意


：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素
。如果不能很好纯化样品 DNA
，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度
。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例

。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行
，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的
、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照
。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6
，5
，4

，3

，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照


。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照
。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照
。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复
。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值

，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴

，绘制标准曲线。

参数规格：

储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集

、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激
，收集血液后

，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆
：将组织加入适量生理盐水捣碎
。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装
，冻存于-20℃
，避免反复冻融
，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻

。
​
检测步骤：
一
、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)
，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中
，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒
。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号
。报告基团：设置为FAM
。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

叶黄素;Xanthophyll 127-40-2 20mg 订购|咨询

愈创木酚;Guaiacol 32994 20mg 订购|咨询

异;Isoeugenol 97-54-1 20mg 订购|咨询

L-异;L-Isoleucine 73-32-5 20mg 订购|咨询

银杏内酯J;Ginkgolide J 107438-79-9 20mg 订购|咨询

氧化石蒜碱;Lycobetaine 72510-04-4 20mg 订购|咨询

盐酸白屈菜红碱;Chelerythrin 3895-92-9 20mg 订购|咨询

银杏酚酸;Ginkgolic acids  20mg 订购|咨询

野菊花内酯;Yejunualactone 62687-22-3 10mg 订购|咨询

2-O-乙酰山椒子烯酮;  10mg 订购|咨询

柚皮素-7-O-葡萄糖醛酸苷;Narin 158196-34-0 10mg 订购|咨询

星状病毒RT-LAMP试剂盒食蟹猴 BMP2 基因全长ORF克隆

人 IL4I1 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签

小鼠 PACSIN3 基因全长ORF克隆

小鼠 IL22 基因全长ORF克隆

人 MAVS 基因全长ORF克隆

人 MRPL16 基因全长ORF克隆

人 VNN2 基因全长ORF克隆

人 ENPP5 基因全长ORF克隆

中东呼吸综合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein 基因全长ORF克隆 (密码子优化)(表达载体), 无标签

重组食蟹猴 Thrombopoietin / THPO / TPO 蛋白 (His 标签)

大鼠 CLEC4A2 基因全长ORF克隆

食蟹猴 CD33 基因全长ORF克隆