老哥俱乐部

细胞培养方法：
1、细胞传代
：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次

；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿
，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后
，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落
，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁
，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清
；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2

、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀
。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀

，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基

。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落
，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清
，加1ml冻存液重悬细胞
；
④将冻存管放入程序降温盒
，放入-80℃冰箱

，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

下列是产品的订购信息：

细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中
，根据要求可始终保持细胞活力
，并可长时间监控

、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况

，包括活细胞的形态
、结构、生命活动等
。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳
、张力等物理化学的条件

，可以根据实际需要进行人为的控制，同时
，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞
，需要时
，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化
。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术
：如倒置生物显微镜
、荧光显微镜

、电子显微镜、流式细胞术
、激光共焦显微镜
、免疫组织化学

、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备
。
​
培养操作步骤 ：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出
，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布
； 
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时
； 
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中


，使盖玻片*浸在培养液中； 
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出
，用盖片镊轻轻取出盖玻片
，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 
实验要点及说明
：
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法； 
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃
，并经过铬酸洗液处理； 
3．盖玻片非常薄
，易碎
，取放盖玻片时动作要轻； 
4．如果需要更多生长状态一致的细胞
，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率； 
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

牛蒡子苷;Arctiin CAS 20362-31-6 规格
：20mg 订购|咨询

利卡灵-B CAS 51020-87-2 规格

：HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

大麦芽碱 CAS 539-15-1 规格：20mg 订购|咨询

马兜铃酸A CAS  规格：20mg 订购|咨询

亥茅酚苷;Sec-O-Glucosylh CAS 80681-44-3 规格：20mg 订购|咨询

亥茅酚苷 CAS 80681-44-3 规格：HPLC≥98%,20mg/支 订购|咨询

诃子鞣质（97%） CAS 23094-71-5 规格
：10mg 订购|咨询

醋酸氢可的松 CAS 514-36-3 规格
：100mg 订购|咨询

橙黄Ⅰ;Orange I CAS 523-44-4 规格：20mg 订购|咨询

新 CAS 13241-33-3 规格
：HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

乙酰紫堇灵 CAS 18797-80-3 规格：20mg 订购|咨询

SW1990细胞，人胰腺癌细胞说明书磷酸化抑制基因P53抗体 英文名称：phospho-P53(Ser392) 0.1ml

磷酸化p21激活激酶1抗体 英文名称：phospho-PAK1 (Ser144) 0.1ml

磷酸化p21激活激酶2抗体 英文名称：phospho-PAK2 (Ser141) 0.1ml

磷酸化p21激活激酶3抗体 英文名称：phospho-PAK3 (Ser139) 0.1ml

磷酸化p21激活激酶1/2/3抗体 英文名称

：phospho-PAK1+PAK2+PAK3 (Ser141) 0.1ml

内分泌腺衍生血管内皮生长因子抗体 英文名称：PROK1/PRK1/EG-VEGF 0.1ml

磷酸化核糖体S6蛋白激酶抗体 英文名称
：phospho-P70 S6 Kinase beta (Thr228) 0.1ml

蛋白激酶样内质网激酶抗体 英文名称：PERK 0.1ml

前列腺特异膜抗原抗体 英文名称
：PMSA 0.1ml

磷脂酰肌醇激酶抗体 英文名称：PI3 kinase p85 alpha subunit 0.1ml

胎盘生长因子抗体 英文名称：PLGF 0.1ml