老哥俱乐部

细胞培养方法
：
1
、细胞传代
：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清
，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）
，使覆盖整个瓶或皿
，盖好放入培养箱消化
；
③1-2min后，显微镜下观察细胞
，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落
，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止
；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中
，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中
。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化

，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀
。
②在1000RPM左右条件下离心4min
，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3
、细胞冻存
：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞
，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落
，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒

，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存
。

下列是产品的订购信息：

细胞培养的优点
：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中
，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH

、温度
、氧气、二氧化碳
、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制
，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时
，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察
、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜
、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学
、原位杂交
、同位素标记等各种仪器设备。
​
培养操作步骤 
：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净
，不要用纱布； 
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）
； 
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中
； 
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天
，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 
实验要点及说明
：
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法； 
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理； 
3．盖玻片非常薄
，易碎，取放盖玻片时动作要轻； 
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿
，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率
； 
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

Masson三色染色试剂盒 7×100ml  瓶

透析袋 扁宽31 截留分子量100-500 0.5m/即用型  管

MTT 噻唑蓝 250mg  支

超滤离心管 0.5ml-100KD 0.5ml  个

D-Arabinose D-阿拉伯糖 10g  瓶

1-Aminocyclopropanecarboxylic acid 1-氨基环丙烷羧酸 1g  瓶

中性红染色液(0.33% 过滤除菌

，活细胞染色) 500ml  瓶

Melatonin 褪黑素 1g  瓶

细胞过滤筛(不锈钢) 50目  个

Mineraloil 矿物油(液体石蜡) 100ml  瓶

GoldView I 型核酸染色剂(10000×) 1ml  瓶

Kojic acid 曲酸 25g  瓶

NRK细胞，大鼠肾小管上皮细胞供应商拟南介金属离子转运蛋白(抗原)Metal ion transporter 0.5mg

黏膜选址素（抗原）MADCAM-1 0.5mg

髓鞘相关糖蛋白a/b(抗原)MAG-a/b (Myelin associated glycoprotein; L / S -MAG;) 0.5mg

髓鞘相关糖蛋白(抗原)MAG (Myelin associated glycoprotein; L-MAG;MAG-a ) 0.5mg

基质金属蛋白酶-1（小鼠抗原）MMP-1(Mous ematrix metalloproteinases-1) 0.5mg

中脑核仁蛋白2（抗原）midnolin isoform Protein 2 0.5mg

中脑核仁蛋白1（抗原）midnolin isoform Protein 1 0.5mg

一种细胞应激分子抗原MICA(MHC class I polypeptide-related sequence A) 0.5mg

多药耐药相关蛋白3(抗原)MRP3(Multidrug Resistanec-Associated Protein 3) 0.5mg

多药耐药相关蛋白1(抗原)MRP1(Multidrug Resistanec-Associated Protein 1) 0.5mg

肺耐药相关蛋白(抗原)LRP/MVP (Lung resistance related protein) 0.5mg