老哥俱乐部

使用方法:
一
、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA
。注意
：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例
。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行
，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的
、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照
。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5
，4，3
，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）
。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照
。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中
，充分震荡 1 分钟

，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照
。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照
。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复
。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴
，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。

参数规格：

储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激
，收集血液后
，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液
：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物

。
4. 组织匀浆

：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装
，冻存于-20℃
，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
​
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)
、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后
，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中

，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液
，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒
。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE
，请勿选择ROX参比荧光。

人参皂苷Rb2Ginsenoside Rb2：1079.2685C53H90O22：11021-13-9

2-溴-5-溴甲噻唑
：256.952- -5- bromide bromine methyl thiazole：131748-91-9 C4H3Br2NS

2,4-二氟吡：115.082,4- two
：34941-90-7 C5H3F2N

1-(氯()甲)-2-甲
：216.711- (chloride (Ben Ji) methyl) -2- methyl benzene
：41870-52-4 C14H13Cl

1,3-双(2,4,6-*)氯咪唑：340.91,3- bis (2,4,6- three)：141556-45-8 C21H25ClN2

聚乙Polystyrene： (C8H8)n
：9003-53-6

磷*酯Phosphate ester

：140.08 C3H9O4P：512-56-1

溴锶
：247.43Strontium bromide：10476-81-0 Br2Sr

硝酸锰溶液：287.04Manganese nitrate solution：17141-63-8 MnN2O6·6H2O

疥螨通用LAMP试剂盒小鼠 MAP2K4 基因全长ORF克隆

小鼠 CDH17 基因全长ORF克隆

小鼠 ACY1 基因全长ORF克隆

人 CAPG 基因全长ORF克隆

人 CD53 基因全长ORF克隆

人 ACTL7A 基因全长ORF克隆

重组人 CCN3 / NOV 蛋白 (His 标签)

人 CA IX 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带Myc标签

人 TLK2 / PKU-ALPHA (aa 397-772 ) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

小鼠 ADAMTS15 基因全长ORF克隆

人 LFNG 基因全长ORF克隆

人 DNAJC30 基因全长ORF克隆