老哥俱乐部

使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意

：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例
。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）
。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原


，本产品不提供活体病毒做阳性对照
，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照
。
1. 标记 6 个离心管

，分别为 6
，5
，4，3，2 和 1 号
。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头，下同）
。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注
：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL
，建议每次稀释 10 倍
，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟

，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照
。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中
，充分震荡 1 分钟

，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中
，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照
。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步）

，每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴
，绘制标准曲线。

参数规格：

储存条件
：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管
，操作过程中避免任何细胞刺激
，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离
。
2. 血浆：EDTA
、柠檬酸盐或肝素抗凝
。3000 转离心30 分钟取上清
。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆

：将组织加入适量生理盐水捣碎
。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装
，冻存于-20℃
，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻
。
​
检测步骤
：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量

，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL

，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内
。
循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光
。

羟基酪醇;3,4-Dihydroxyph 10597-60-1 50mg 订购|咨询

去甲碱;Higenamine 5843-65-2 20mg 订购|咨询

芹菜苷;Apiin 26544-34-3 20mg 订购|咨询

1-羟基-2,3,4,7-四甲氧基山山酮 14103-09-4 10mg 订购|咨询

去甲基川陈皮素;Demethylnobi 2174-59-6 20mg 订购|咨询

芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷;Api 578-74-5 10mg 订购|咨询

芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷;Apige 29741-09-1 10mg 订购|咨询

5-羟基-6,7-二甲氧基黄酮;5-Hy 740-33-0 10mg 订购|咨询

5-羟基-7,8-二甲氧基黄酮;5-hy 3570-62-5 10mg 订购|咨询

去氢荷包牡丹碱;Dehydrodicen  10mg 订购|咨询

去氢吴茱萸碱;Dehydroevodia 67909-49-3 10mg 订购|咨询

蓝舌病病毒型RT-LAMP试剂盒乙醛脱氢酶家族3成员A1抗体 英文名称
：ALDH3A1 0.1ml

磷酸化热休克蛋白β5/αb晶体蛋白质/α-晶体蛋白b链抗体 英文名称：phospho-alpha B Crystallin (Ser59) 0.1ml

γ2肌动蛋白抗体 英文名称
：ACTG2 0.2ml

gp130结合蛋白GAM抗体 英文名称：AES 0.2ml

缪勒激素2型受体抗体 英文名称：AMHR2 0.1ml

激活素受体2A抗体 英文名称：ACTR2 0.2ml

激活素受体1A抗体 英文名称
：ACTR1 0.2ml

激活素受体2B抗体 英文名称
：Activin Receptor Type IIB 0.2ml

2号染色体开放阅读框88抗体 英文名称
：C2orf88  0.2ml

G蛋白偶联受体ARHGEF18抗体 英文名称
：ARHGEF18 0.2ml

激活素受体1B抗体 英文名称：Activin A Receptor Type IB 0.2ml