老哥俱乐部

细胞培养方法

：
1、细胞传代
：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）
，使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化
；
③1-2min后
，显微镜下观察细胞
，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落
，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化
；若细胞还是贴壁
，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中
，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集

，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中
。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存
：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清
，用PBS或生理盐水清洗1-2次
，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化

；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清
，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒

，放入-80℃冰箱
，4小时后将冻存管转入液氮罐储存

。

下列是产品的订购信息
：

细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力
，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况
，包括活细胞的形态
、结构、生命活动等
。
2.研究条件可以人为控制
pH

、温度
、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时

，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下
。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后
，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术
：如倒置生物显微镜
、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术
、激光共焦显微镜、免疫组织化学
、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
​
培养操作步骤 ：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净
，不要用纱布
； 
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）
； 
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中
； 
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片
，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测
。 
实验要点及说明：
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法； 
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理； 
3．盖玻片非常薄，易碎
，取放盖玻片时动作要轻

； 
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿
，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率； 
5．如果细胞贴壁生长能力较差
，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干
。

羟基芍药苷;oxypaeoniflori CAS 39011-91-1 规格
：20mg 订购|咨询

石斛碱 CAS  规格
：约20mg/支 订购|咨询

亚木酚素 CAS 148244-82-0 规格：HPLC≥98%,20mg/支 订购|咨询

松脂醇二葡萄糖苷 CAS 63902-38-5 规格：20mg 订购|咨询

巴芬杂质A CAS  规格
：50mg 订购|咨询

七叶皂苷 IIa;Escin IIa CAS  规格
：10mg 订购|咨询

连翘酯苷A CAS 79916-77-1 规格
：HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

7－羟基马兜铃酸A CAS 79185-75-4 规格：10mg 订购|咨询

京平（格泊素）-对照品;有报告 CAS 6902-77-8 规格：20mg 订购|咨询

大风子 CAS  规格
：5g 订购|咨询

天然;Borneol CAS 507-70-0 规格：200mg 订购|咨询

P19细胞
，畸胎癌细胞价格生长因子受体结合蛋白2相关接头蛋白2抗体 英文名称
：GRAP2 0.2ml

G蛋白α亚单位蛋白Q抗体 英文名称
：GNAQ 0.2ml

生长抑制DNA损伤基因GADD45β抗体 英文名称

：GADD45B 0.1ml

细胞生长抑制蛋白22抗体（甲基化控制J蛋白） 英文名称
：GIG22 0.2ml

G蛋白偶联受体39抗体 英文名称
：GPR39 0.1ml

半糖凝集素8抗体 英文名称：Galectin 8 0.1ml

桥尾蛋白抗体 英文名称：Gephyrin 0.1ml

糖磷脂酰肌醇锚定蛋白137抗体 英文名称

：GPIP137 0.2ml

胰高血糖素样肽2受体抗体 英文名称：GLP2R 0.2ml

生长休止特定蛋白1抗体 英文名称：Gas1 0.2ml

γ-谷氨酰转移酶轻链1抗体 英文名称：GGTL1 0.2ml