老哥俱乐部

培养操作步骤 ：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出
，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布
； 
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）

； 
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中； 
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片
，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测
。 

下列是产品的订购信息
：

细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力
，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况
，包括活细胞的形态

、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气
、二氧化碳、张力等物理化学的条件
，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下

。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后
，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化
。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜
、荧光显微镜、电子显微镜
、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交
、同位素标记等各种仪器设备。
​
实验要点及说明：
1．本方法适用于贴壁细胞培养
，而不适用于悬浮细胞培养
，悬浮细胞可使用滴片法

； 
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理
； 
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻； 
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大
，以避免培养液的浪费和增加污染机率
； 
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

细胞培养方法
：
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿
，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后
，显微镜下观察细胞

，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止
；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中
，T25培养瓶加6-8ml培养基

；
⑥悬浮细胞直接离心收集
，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中
。
2
、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀

，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3
、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞

；
④将冻存管放入程序降温盒
，放入-80℃冰箱
，4小时后将冻存管转入液氮罐储存
。

脱氧核糖胸腺核苷酸 CAS  规格：20mg/支 订购|咨询

多效唑;纯品型;标准品;有证书 CAS 76738-62-0 规格：0.1g 订购|咨询

木香烃内酯 CAS 553-21-9 规格：20mg 订购|咨询

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重楼皂苷I CAS 50773-41-6 规格
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补骨脂乙素 CAS 20784-50-3 规格：20mg 订购|咨询

LLC细胞，小鼠肺癌细胞规格巨噬细胞炎性蛋白1β抗原CCL4/MIP-1 Beta(Macrophage Inflammatory Protein 1 beta) 0.5mg

巨噬细胞炎性蛋白3α抗原MIP3 Alpha/CCL20(Macrophage inflammatory ptotein 3 alpha) 0.5mg

单核细胞趋化蛋白5抗原CCL12/MCP-5(C-C motif chemokine 12) 0.5mg

嗜酸粒细胞趋化蛋白14抗原CCL14/HCC-1(C-C motif chemokine 14) 0.5mg

嗜酸粒细胞趋化蛋白22抗原ABCD-1/CCL22 0.2mg

嗜酸粒细胞趋化蛋白3抗原CCL26(Eotaxin 3) 0.5mg

巨噬细胞炎性蛋白19抗原MIP-3 beta/ELC/CCL19(Macrophage Inflammatory Protein 3 Beta) 0.5mg

细胞表面趋化因子受体1抗原CCR-1(CC chemokine receptor 1) 0.5mg

CC趋化因子受体3抗原CCR-3(CC chemokine receptor 3) 0.5mg

细胞表面趋化因子受体2A抗原CCR-2A(C-C Chemokine receptor 2A) 0.5mg

细胞表面趋化因子受体4抗原CCR-4(C-C chemokine receptor 4) 0.5mg