老哥俱乐部

细胞培养方法：
1
、细胞传代

：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）
，使覆盖整个瓶或皿
，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落
，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基
；
⑥悬浮细胞直接离心收集

，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右
，加入4-5ml培养基混匀
。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基
。
3、细胞冻存
：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次
，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落
，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存
。

下列是产品的订购信息：

细胞培养的优点
：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况

，包括活细胞的形态
、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH
、温度

、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察
，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后
，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞
，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化
。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术
：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术
、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交

、同位素标记等各种仪器设备。
​
培养操作步骤 
：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净
，不要用纱布； 
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）
； 
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时
； 
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中
，使盖玻片*浸在培养液中
； 
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时
，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片
，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 
实验要点及说明：
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法； 
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理
； 
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻； 
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿
，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率； 
5．如果细胞贴壁生长能力较差
，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

冬凌草甲素 CAS 28957-04-2 规格
：HPLC≥98%,20mg/支 订购|咨询

酚 CAS 520-18-3 规格：HPLC≥98%；20mg/vial 订购|咨询

丙胺杂质A CAS  规格：100mg 订购|咨询

异荭草素; Homoorientin CAS 4261-42-1 规格：20mg 订购|咨询

金丝桃素;Hypericin CAS 548-04-9 规格：10mg 订购|咨询

酶（欧文菌） CAS  规格
：5mg/支 订购|咨询

托芬那酸 CAS  规格：100mg 订购|咨询

石蒜碱;Lycorine CAS 476-28-8 规格：20mg 订购|咨询

补骨脂二氢黄甲 CAS 19879-30-2 规格
：HPLC≥99%;20mg 订购|咨询

青藤碱 CAS 6080-33-7 规格：20mg 订购|咨询

*基间苯 CAS  规格：50mg 订购|咨询

P815细胞，小鼠肥大细胞癌细胞价格神经生长因子受体的一种（抗原）Trk B 0.5mg

神经生长因子受体的一种（抗原）Trk C 0.5mg

促甲状腺素受体（抗原）TSHR (Thyroid stimulating hormone receptor)(NT) 0.5mg

半蛋白酶8抗原Caspase-8 (pro Mch5) 0.5mg

促甲状腺素受体（抗原）TSHR (Thyroid stimulating hormone receptor)(CT) 0.5mg

微管蛋白（抗原）Tubulin-Alpha 0.5mg

羟化酶（抗原）TY3H ( Tyrosine Hydroxylase ) 0.5mg

细胞质膜微囊蛋白-1抗原Cav-1/ETM1 peptide 0.5mg

 β-连环蛋白抗原（β-β链接素）Beta-catenin/ Beta-cats 0.5mg

磷酸化β-连环蛋白抗原p- Beta catenin(p-beta Catenin(phosphor-Y142)) 0.5mg

微管蛋白（抗原）Tubulin- Beta 0.5mg