老哥俱乐部

细胞培养方法：
1
、细胞传代
：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清
，用PBS或生理盐水清洗1-2次
；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞
，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化

；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清
；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2
、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次
，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后
，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化
；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清
，加1ml冻存液重悬细胞
；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

下列是产品的订购信息

：

细胞培养的优点
：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构

、生命活动等
。
2.研究条件可以人为控制
pH
、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件
，可以根据实际需要进行人为的控制，同时
，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察
，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后
，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞
，需要时

，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化
。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术
：如倒置生物显微镜

、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜
、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备
。
​
培养操作步骤 
：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）

； 
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中； 
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出
，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测
。 
实验要点及说明

：
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养
，悬浮细胞可使用滴片法
； 
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理
； 
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻； 
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿
，但不宜过大
，以避免培养液的浪费和增加污染机率； 
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

MG-63(人骨肉瘤细胞)5×106cells/瓶×2gersion

人回盲肠细胞出芽短梗霉=出芽茁霉 Aureobasidium pullulans

产黄青霉 Penicillium chrysogenumEBTr (NBL-4) (牛胚气管细胞)

小鼠腮腺细胞*培养基100mL

人口腔上皮细胞KB

H4-IIE(大鼠肝细胞 )5×106cells/瓶×2

NCI-H2087(人非小细胞肺腺细胞)5×106cells/瓶×2gersion

WM35, 人黑色素瘤细胞小鼠肾上皮细胞*培养基

串珠菌 Leuconostoc lactisCoC1(人卵巢细胞)

769-P(人肾细胞腺细胞)球形节杆菌 Arthrobacter globiformis

TMB Kit/TMB底物显色试剂盒（可溶型）100ml100ml

L-MTK细胞，鼠胸腺激酶缺陷细胞株说明书兔子β内啡肽Beta-EP (Rabbit Beta-Endorphin) ELISA Kit 96T

小鼠神经丝蛋白Mouse neurofilament protein,NF ELISA Kit 96T

鱼磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶AMPK ELISA Kit  96T

E Fc段受体ⅡFc Epsilon R II /CD23(Human Receptor II for the Fc region of immunoglobulin E,Fc Epsilon R II ) ELISA Kit 96T

大鼠抗红细胞抗体RBC(Rat anti-red cell antibody )ELISA Kit 96T

鱼卵黄高磷蛋白PV ELISA Kit 96T

G Fc段受体ⅢFc GammaR III /CD16(Human Receptor III for the Fc region of immunoglobulin G,Fc GammaR III ) ELISA Kit 96T

兔核因子κB亚基p65亲和肽NF-KapB p65 (Rabbit nuclear factor-KapB p65) ELISA Kit 96T

乙型肝炎二对半全套 96T

大鼠CD3分子CD3(Rat Cluster of differentiation 3,CD3) ELISA Kit 96T

小鼠抗小核糖核蛋白/Sm抗体Mouse small nuclear ribonucleoprotein,snRNP/Sm ELISA Kit  96T