老哥俱乐部

细胞简介：

集合管是由皮质走向髓质椎体孔的小管
，沿途有许多肾单位的远曲小管与之相连，管径逐渐变粗
，管壁逐渐变厚

，管壁由柱状上皮构成。

集合管流的是小管液，肾脏血液经肾小球滤过，形成的原尿，进入肾小管后就称为小管液，小管液流向集合管进一步滤过和重吸收形成终尿
。

细胞特性：

1）组织来源于实验动物的正常肾脏组织。

2)细胞鉴定
：细胞角蛋白-18（CK-18）荧光染色为阳性
。

3)经鉴定细胞纯度高于90%
。

4)不含有 HIV-1
、 HBV、HCV、支原体、

、酵母和。

5)细胞生长方式：铺路石状细胞，不规则细胞，贴壁培养
。

推荐培养基

：

老哥俱乐部推荐使用 DELF 原代 上皮 细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告
：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液

，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基

，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min

，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等

，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题

，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞

，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

大鼠β淀粉样蛋白1-42(Aβ 1-42)检测试剂盒 ，英文名： Aβ 1-42 ELISA Kit

Mouse follicle stimulating hormone (FSH) ELISA Kit 小鼠促卵泡素(FSH)检测试剂盒

ELISA 小鼠氧化低密度脂蛋白(mouse OxLDL)  进口分装

CLIAKitforIL-1(HumanIerleukin1)ELISAKit人白介素1

通用型离子(Na)浓度化学比色法定量检测试剂盒50次

ELISAKitACE大鼠血管紧张素转化酶

ENPP2重组小鼠 Autotaxin / ENPP2 / NPP2 蛋白 (His 标签) Protein

Actin Alpha /Alpha-SMA (Actin alpha , smooth muscle aorta 0.5mgActin Alpha /Alpha-SMA (Actin alpha , smooth muscle aorta) 肌动蛋白(抗原)

ANTXR1重组人 ANTXR1 蛋白  Protein

FCGR3A Protein Human 重组人 CD16a / FCGR3A 蛋白 (176 Val, His 标签)

ALCAM Protein Rat 重组大鼠 ALCAM / CD166 蛋白 (His 标签)

促胰液素(SCT)重组蛋白 Recombinant Secretin (SCT)

FCGR3A Protein Human 重组人 CD16a / FCGR3A 蛋白 (176 Val, His 标签)

ART4重组小鼠 Art4 / CD297 蛋白  Protein

IFNGR1 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 IFNGR / IFNGR1 蛋白

FCGR2A重组人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 His, His 标签) Protein

小鼠氧化酶(DAO)ELISA 试剂盒

Human mitogen activated protein kinase /MAP kinase (MAPK) ELISA Kit 人原激活的蛋白激酶/MAP激酶(MAPK)检测试剂盒

Humanβ-subunitsofhemoglobin,HB-βELISAKit 人血红蛋白β亚基(HB-β)检测试剂盒 进口分装

HumanAprotinin,AP检测试剂盒人AP)检测试剂盒

植物乙醇脱氢酶总活性(NDMA)比色法定量检测试剂盒20次

Humaissueinhibitorsofmetalloproteinase1
，TIMP-1ELISAKit人基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)检测试剂盒

小鼠肾集合管上皮细胞纤溶酶原激活剂抑制因子1   英文名称：   Human Plasminogen Activator Inhibitor 1   规格
：      英文缩写
：   PAI-1

纤溶酶原激活剂抑制因子2   英文名称：   Human Plasminogen Activator Inhibitor 2   规格：      英文缩写：   PAI2

血小板活化因子受体   英文名称：   Human Platelet Activating Factor Receptor   规格：      英文缩写
：   PAFR

血小板衍生生长因子c   英文名称：   Human Platelet Derived Growth Factor C   规格：      英文缩写：   PDGF-C