老哥俱乐部

细胞简介
：

肌腱细胞是肌腱组织的基本功能单位，主要合成和分泌胶原蛋白、弹性蛋白和糖蛋白基质，维持肌腱组织的新陈代谢
。

肌腱损伤后的方式包括内源性和外源性，而理想的方式是控制外源性，促进内源性。内源性的机制是肌腱细胞通过细胞自身的增殖从而促进肌腱，但目前肌腱细胞在体外经过多次传代培养后会丧失分裂增殖能力
。

目前已知多种因素影响肌腱过程

，其中与肌腱关系密切的有着重要调控作用的细胞因子主要有：碱性成纤维生长因子
，转化生长因子 β
，骨形态发生蛋白-12，血管内皮生长因子
，胰岛素样生长因子-1
，血小板源性生长因子等。

细胞特性：

1） 组织来源于实验动物的肌腱组织。

2) 细胞鉴定
：Ⅰ型胶原荧光染色为阳性
。

3) 经鉴定细胞纯度高于90%。

4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV
、支原体

、、酵母和。

5) 细胞生长方式


：梭形细胞
，不规则细胞，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 Delf 原代肌腱 细胞 培养体系 作为体外培养的培养基
。

实验报告：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶

，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2

、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4

、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片

，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注

：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠B细胞κ轻肽基因增强子核因子抑制因子α(NFKBIA)检测试剂盒
，英文名： NFKBIA ELISA Kit

Mouse glamic acid decarboxylase aoaibody (GAD-Ab) ELISA Kit 小鼠谷脱羧酶自身抗体(GAD-Ab)检测试剂盒

MouseNeuroglobin,NGBELISAKit 小鼠脑红蛋白(NGB)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumaissuefactor,IFELISAKit人组织因子

通用型血液凝集分子纤维蛋白检测法(Fibrometer)分析试剂盒50次

ELISAKitLDH大鼠乳酸脱氢酶

CD28重组小鼠 CD28 蛋白 Protein

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ENTPD2重组人 NTPDase 2 / ENTPD2 蛋白 (aa 29-460, His 标签) Protein

FCGR2A Protein Human 重组人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 His, His & AVI 标签), Biotinylated

TNFSF9 Protein Rat 重组大鼠 4-1BBL / CD137L / TNFSF9 蛋白 (Fc 标签)

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FCGR2A Protein Human 重组人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 His, His & AVI 标签), Biotinylated

CD28重组小鼠 CD28 蛋白 Protein

TNFSF9 Protein Rat 重组大鼠 4-1BBL / CD137L / TNFSF9 蛋白 (Fc 标签)

ENTPD2重组人 NTPDase 2 / ENTPD2 蛋白 (aa 29-460, His 标签) Protein

小鼠肝脂酶(HL)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human eosinophil chemotactic factor (ECF) ELISA Kit 人鼠嗜酸粒细胞趋化因子(ECF)检测试剂盒

Humanferritin,FEELISAKit 人铁蛋白(FE)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanAi-tissueanGSlaminaseIgA,tTG-IgA检测试剂盒人抗组织转酶抗体IgA(tTG-IgA)检测试剂盒规格：96T/48T

植物氧化型(GSSG)浓度高效液相色谱定量检测试剂盒50次

HumanansformingGrowthfactorβ1，TGF-β1ELISAKit人转化生长因子β1(TGF-β1)检测试剂盒规格

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大鼠肌腱细胞小鼠6--前列腺素F1a(mouse 6-k-PGF1a)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠前列腺素E2(mouse PGE2)   作用
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：      进口分装

小鼠0脂酶A2(mouse sPLA2)   作用
：   ELISA   规格
：      进口分装

小鼠Pleioophin（mouse Pleioophin）   作用
：   ELISA   规格：      进口分装