老哥俱乐部

细胞简介

：

大约 85%的卵巢癌来源于卵巢表面上皮，它的发生是一个多因素作用、多基因参与

、经过多个阶段才终形成的及其复杂的生物学过程
。因此，体外培养卵巢表面上皮细胞为研究卵巢表面上皮的功能及其逐步癌变过程对卵巢癌的防治起着重要作用
。此外，有研究表明
，表皮生长因子对卵巢表面上皮细胞的生长和状态十分有益
。

细胞特性：

1）组织来源于实验动物的正常卵巢组织。

2)细胞鉴定：细胞角蛋白-19（CK-19）荧光染色为阳性
。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV
、HCV、支原体、
、酵母和。

5)细胞生长方式：圆形、卵圆形或多角形细胞

，不规则细胞
，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 Delf 原代上皮 细胞 培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告
：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）

，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃

，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1

、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次

，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5

、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象

，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例


、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化

，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品
：

细胞摩罗利（MALLORY/PERLS）铁（三价）染色试剂盒

石蜡切片脂质过氧化物4-羟基壬烯醛（4－HNE）荧光染色试剂盒

大鼠组织型纤溶酶原激活剂(t-PA) elisa检测试剂盒

血液糖胺多糖（GAG）总含量阿尔新蓝（alcian blue）比色法定量检测试剂盒

小鼠白介素33(IL33)elisa检测试剂盒

大鼠磷酸化乙酰A羧化酶(pACCase)elisa检测试剂盒

动物软组织线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒

食蟹猴胰高血糖素(GC)elisa检测试剂盒

通用型鸡病毒性关节炎呼肠孤病毒（Reovirus；REO）基因

GSH2蛋白抗体 GSH2

G蛋白偶联受体34抗体 GPR34

脑肠肽O酰基转移酶/Ghrelin O acyltransferase抗体 MBOAT4

拟南芥IKI3抗体 ELP1

二酰基甘油酰基转移酶2样蛋白3抗体 DGAT2L3

防御素β-118/β-defensin 118抗体 DEFB118

羊抗抗体 human Fibrinogen

胰腺弹性蛋白酶3B抗体 Elastase 3B

SFXN5蛋白抗体 SFXN5

S期细胞周期相关蛋白抗体 SPHAR

源盒蛋白HOXD10抗体 HOXD10

脱氧胞苷激酶抗体 DCK

胶质细胞谷运载蛋白2抗体 EAAT2

精神分裂症相关蛋白9抗体 RGS4

6号染色体开放阅读框203抗体 C6orf203

AF680标记的髓样细胞白血病-1抗体 MCL1, Alexa Fluor 680 conjugated

田鼠睾酮(T)elisa分析检测试剂盒

绵羊Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)elisa分析检测试剂盒

血液丙二醛（MDA）比色法定量检测试剂盒

小鼠骨成型蛋白受体1A(BMPR-1A)elisa检测试剂盒

大鼠卵巢表面上皮细胞大鼠白介素1α（IL－1α）elisa检测试剂盒