細胞簡介 ：

大約 85%的卵巢癌來源於卵巢表麵上皮 ，它的發生是一個多因素作用 、多基因參與 、經過多個階段才終形成的及其複雜的生物學過程 。因此 ，體外培養卵巢表麵上皮細胞為研究卵巢表麵上皮的功能及其逐步癌變過程對卵巢癌的防治起著重要作用。此外 ，有研究表明 ，表皮生長因子對卵巢表麵上皮細胞的生長和狀態十分有益 。

細胞特性 ：

1）組織來源於實驗動物的正常卵巢組織 。

2)細胞鑒定 ：細胞角蛋白-19（CK-19）熒光染色為陽性 。

3)經鑒定細胞純度高於90%。

4)不含有 HIV-1 、 HBV 、HCV 、支原體 、、酵母和 。

5)細胞生長方式 ：圓形 、卵圓形或多角形細胞 ，不規則細胞 ，貼壁培養 。

推薦培養基 ：

老哥俱樂部推薦使用 Delf 原代上皮 細胞 培養體係 作為體外培養的培養基 。

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

細胞摩羅利（MALLORY/PERLS）鐵（三價）染色試劑盒

石蠟切片脂質過氧化物4-羥基壬烯醛（4－HNE）熒光染色試劑盒

大鼠組織型纖溶酶原激活劑(t-PA) elisa檢測試劑盒

血液糖胺多糖（GAG）總含量阿爾新藍（alcian blue）比色法定量檢測試劑盒

小鼠白介素33(IL33)elisa檢測試劑盒

大鼠磷酸化乙酰A羧化酶(pACCase)elisa檢測試劑盒

動物軟組織線粒體可溶性總蛋白製備試劑盒

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通用型雞病毒性關節炎呼腸孤病毒（Reovirus ；REO）基因

GSH2蛋白抗體 GSH2

G蛋白偶聯受體34抗體 GPR34

腦腸肽O酰基轉移酶/Ghrelin O acyltransferase抗體 MBOAT4

擬南芥IKI3抗體 ELP1

二酰基甘油酰基轉移酶2樣蛋白3抗體 DGAT2L3

防禦素β-118/β-defensin 118抗體 DEFB118

羊抗抗體 human Fibrinogen

胰腺彈性蛋白酶3B抗體 Elastase 3B

SFXN5蛋白抗體 SFXN5

S期細胞周期相關蛋白抗體 SPHAR

源盒蛋白HOXD10抗體 HOXD10

脫氧胞苷激酶抗體 DCK

膠質細胞穀運載蛋白2抗體 EAAT2

精神分裂症相關蛋白9抗體 RGS4

6號染色體開放閱讀框203抗體 C6orf203

AF680標記的髓樣細胞白血病-1抗體 MCL1, Alexa Fluor 680 conjugated

田鼠睾酮(T)elisa分析檢測試劑盒

綿羊Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)elisa分析檢測試劑盒

血液丙二醛（MDA）比色法定量檢測試劑盒

小鼠骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)elisa檢測試劑盒

大鼠卵巢表麵上皮細胞大鼠白介素1α（IL－1α）elisa檢測試劑盒