老哥俱乐部

细胞简介：

膀胱壁由三层组织组成

，由内外为粘膜层、肌层和外膜。其中，粘膜层为极薄的一层移行上皮组织
，和输尿管及尿道黏膜彼此连贯。体外培养膀胱上皮细胞不仅为组织工程膀胱，尿道提供种植细胞的必要手段
，也是研究移行上皮细胞肿瘤发生和的基础与前提
。

细胞特性：

1）组织来源于实验动物的正常膀胱组织。

2)细胞鉴定
：广谱角蛋白(PCK)荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%
。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV
、支原体、、酵母和。

5)细胞生长方式：铺路石状细胞
，不规则细胞
，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 Delf 原代上皮 细胞 培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告


：

一

、分离与培养
：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基

，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4

、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品：

12-HETEELISAKit

GSK3β相互作用蛋白抗体

HSPC210/GSK3beta interaction protein

乳腺癌相关蛋白2抗体

BCAS2

非位素HRP－DAB显色法DNA南方杂交试剂盒

多酚氧化酶(PPO）试剂盒

植物亮（leucine）含量比色法定量检测试剂盒

小鼠半乳凝素3(GAL-3)elisa检测试剂盒

转化相关基因MED11抗体

MED11

源转录因子DLX5抗体

Dlx5

酶(因子II)轻链抗体  Anti-Thrombin light chain

梅克尔憩室综合征相关蛋白5抗体  Anti-RPGRIP1L

核受体蛋白NR2E1抗体  Anti-NR2E1/Tailless

Wnt信号抑制因子1抗体  Anti-WIF1

骨骼肌慢肌肌钙蛋白T抗体

TNNT1

线粒体核糖体蛋白L24抗体

MRPL24

胚胎干细胞抑制蛋白Suz12抗体  Anti-SUZ12/CHET9

氧化低密度脂蛋白抗体  Anti-ox-LDL

磷酸化丝/苏蛋白激酶Plk1抗体  Anti-Phospho-PLK1(Ser482+Ser486+Ser490)

血管生成素受体2抗体  Anti-TIE2/CD202b

Cy5.5标记大鼠IgG（型对照)

人类状瘤病毒HPV116 gp2抗体

HPV116 gp2

三号染色体开放阅读框抗体

大鼠膀胱上皮细胞APRG1

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系

。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，

，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用

。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞

。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。