老哥俱乐部

细胞简介：

心脏壁主要由心肌构成，心房壁比心室壁薄
。心肌的工作细胞包括心房肌和心室肌
。心肌细胞为短柱状，一般只有一个细胞核
，心肌细胞之间有闰盘结构
。心房与心室的心肌层不直接相连，它们分别起止于心房和心室交界处的纤维支架，形成各自独立的肌性壁，从而保证心房和心室各自进行独立的收缩舒张，以推动血液在心脏内的定向流动。

临床研究表明
，在房颤患者心房肌细胞内，发现存在有异常增高的细胞内钙蓄积，并证实心肌细胞内钙超载在心律失常的发生中起着关键作用。此外，在房颤患者心房细胞内也发现有CaMK Ⅱ的异常高表达
。

细胞特性：

1） 组织来源于实验动物的正常心脏组织。 本细胞为终末分化细胞，增殖能力很弱，建议客户收到细胞后直接用于后续实验，不要进行扩增培养。

2) 细胞鉴定
：肌球蛋白重链(Myosin heavy chain)荧光染色为阳性。

3) 细胞纯度

：经鉴定细胞纯度高于90%。

4) 不含有 HIV-1
、 HBV、HCV、支原体、、酵母和。

5) 细胞生长方式：柱状细胞，不规则细胞，贴壁培养
。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 delf原代心肌细胞培养体系 作为该细胞的体外培养试剂。

实验报告
：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二

、免疫荧光鉴定

：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min

，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下

，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜

；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品
：

大鼠白三烯B4(LTB4)检测试剂盒 ，英文名
： LTB4 ELISA Kit

Mouse ierleukin 12 (IL-12/P40) ELISA Kit 小鼠白介素12(IL-12/P40)检测试剂盒

ELISA 小鼠胰高血糖素(mouse Glucagon)  进口分装

CLIAKitfori-PTH(MouseiactParathormone)ELISAKit小鼠全段甲状旁腺素

通用型非蛋白/游离巯基含量比色法定量检测试剂盒20次

ELISAKitADP大鼠脂联素

CA8重组小鼠 Carbonic Anhydrase VIII / Car8 蛋白 Protein

CD200受体1(CD200R1)重组蛋白 Recombinant CD200 Receptor 1 (CD200R1)

IP6K1重组人 IHPK1 蛋白 (His & GST 标签) Protein

EPOR Protein Human 重组人 EPO Receptor / EPOR 蛋白

FCAR Protein Rat 重组大鼠 CD89 / FCAR 蛋白

脯氨酰羧肽酶(PRCP)重组蛋白 Recombinant Prolylcarboxypeptidase (PRCP)

EPOR Protein Human 重组人 EPO Receptor / EPOR 蛋白

CCL3重组小鼠 CCL3 / Mip1a 蛋白 Protein

SERPINC1 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 SerpinC1 / AntithrombinIII / ATIII 蛋白

CD3D & CD3E重组人 CD3D & CD3E Heterodimer 蛋白 Protein

小鼠肌球蛋白(Myosin)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat granulocyte colony stimulating factor (G-CSF) ELISA Kit 大鼠粒细胞集落刺激因子(G-CSF)检测试剂盒

Humanprotocadherin1,PCDH1ELISAKit 人原钙黏素1(PCDH1)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanai-livercytosolaibodytype1,LC1检测试剂盒人抗肝细胞胞质1型抗体(LC1)检测试剂盒规格：96T/48T

植物内质网粗提分离试剂盒10次

Humanvanillylmandelicacid,VMAELISAKit人垂草扁桃酸(VMA)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠心房心肌细胞小鼠白介素23(IL-23)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠白介素2(IL-2)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠白介素1受体拮抗剂(IL-1Ra)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠白介素1可溶性受体Ⅱ(IL-1sRⅡ)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题

，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清

。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。