老哥俱乐部

细胞简介
：

微血管内皮细胞受损已被视为创伤、感染、休克、肿瘤、血管等多种和综合症发展的病理基础
。一旦微血管内皮细胞受损
，必然影响甚至破坏微血管内皮细胞正常的生物学功能，引起多种的发生。

微血管内皮细胞间连接与血管通透性有着非常密切的关系。微血管内皮细胞合成与分泌前列环素
、一氧化氮、内皮源性超极化因子和内皮素等物质
，来维持血管的正常状态

。

细胞特性：

1）组织来源于实验动物的正常脂肪组织。

2)细胞鉴定
：血管假性血友病因子（vWF）荧光染色为阳性
。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、、酵母和。

5)细胞生长方式：铺路石状细胞，不规则细胞，贴壁培养
。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 Delf 内皮 细胞 培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告
：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养


；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基

，用温育的PBS冲洗细胞2次

，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2

、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

Mousestreptococcal(SK)antibody(IgG)ELISAkit

大鼠L选择素(L-Selectin/CD62L)elisa分析检测试剂盒

Rat L-Selectin ELISA kit

人骨保护素(OPG)elisa分析检测试剂盒

OPGELISAKIT

活化部分活酶时间（APTT）检测试剂盒

鲑鱼补体蛋白3(C3)elisa检测试剂盒

721型分光光度仪1毫升1厘米光径塑料比色皿

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人8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)elisa检测试剂盒

组织艾滋病毒1（HIV-1 PROTEASE）活性荧光淬灭法

OTOP3蛋白抗体

OTOP3

Heme结合蛋白2抗体

HEBP2

Tar DNA 结合蛋白43抗体  Anti-TDP-43/TARDBP

蛋白质二硫键异构酶抗体  Anti-PDI/P4HB/ERp57/PDIA3

蛋白酶体PSMβ6抗体  Anti-Proteasome 20S beta 6

细胞分化蛋白SEPT10抗体  Anti-SEPT10

PE标记的小鼠抗人IgM

植物蔗糖磷酸合成酶(SPS)elisa生化检测试剂盒

SPS ELISA Kit

人存活素抗体/生存蛋白(Surv)elisa生化检测试剂盒

大鼠脂肪微血管内皮细胞SurvELISAKit

注意事项

：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系

。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息

，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。