老哥俱乐部

细胞简介
：

软骨细胞存在于关节软骨中，负责分泌 II型胶原和其它类型的胶原以及非胶原的细胞外基质大分子
。成软骨细胞的增殖和分化与脊椎动物骨架的发育有着密切的关系。软骨细胞能分泌和响应一系列的生长因子，包括IGF-1和IL1。体外培养的软骨细胞是研究软骨修复和关节炎病理的有用模型

。

细胞特性：

1） 组织来源于实验动物的椎体终板软骨关节组织
。

2） 细胞鉴定：Ⅱ型胶原(Collagen Ⅱ)荧光染色为阳性
。

3） 经鉴定细胞纯度高于90%。

4） 不含有 HIV-1、 HBV、HCV
、支原体、、酵母和。

5） 细胞生长方式：长梭状

，不规则细胞，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 Delf原代 软骨 细胞 培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织

，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小

；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清

，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后

，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4

、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液

、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片

，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

大鼠P0蛋白(p0)检测试剂盒 
，英文名： p0 ELISA Kit

Mouse dopamine D1 receptor (D1R) ELISA Kit 小鼠多巴胺D1受体(D1R)检测试剂盒

ELISA 小鼠基质金属蛋白酶抑制剂-1(mouse TIMP-1)  进口分装

CLIAKitforIFI16/p16(Humanierferon-inducibleprotein16)ELISAKit人γ干扰素诱导蛋白16/p16

通用型沙眼衣原体(Chlamydia)试剂盒20次

ELISAKitFE大鼠铁蛋白

BTC重组小鼠 BTC / Betacellulin 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

CCL4/MIP-1 Beta(Macrophage Inflammatory Protein 1 beta 0.5mgCCL4/MIP-1 Beta(Macrophage Inflammatory Protein 1 beta) 巨噬细胞性蛋白1β抗原

UBE2G1重组人 UBE2G1 蛋白 Protein

FKBP3 Protein Human 重组人 FKBP3 / FKBP25 蛋白 (GST 标签)

PDGFRA Protein Rat 重组大鼠 PDGFRa / CD140a 蛋白 (Fc 标签)

CCL4/MIP-1 Beta(Macrophage Inflammatory Protein 1 beta 0.5mgCCL4/MIP-1 Beta(Macrophage Inflammatory Protein 1 beta) 巨噬细胞性蛋白1β抗原

FKBP3 Protein Human 重组人 FKBP3 / FKBP25 蛋白 (GST 标签)

BTC重组小鼠 BTC / Betacellulin 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

PDGFRA Protein Rat 重组大鼠 PDGFRa / CD140a 蛋白 (Fc 标签)

UBE2G1重组人 UBE2G1 蛋白 Protein

小鼠大内皮素(Big ET)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat coagulation factor XIII (F XIII) ELISA Kit 大鼠ⅩⅢ(FⅩⅢ)检测试剂盒

HumanGlycogenphosphorylaseII,GP-IIELISAKit 人糖原0酸化酶同工酶II(GP-II)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanbasicfetoprotein,BFP检测试剂盒人碱性胎儿蛋白(BFP)检测试剂盒规格
：96T/48T

植物脂肪酸合成酶(fattyacidsyhase)活性比色法定量检测试剂盒20次

HumaetanusAibodyELISAKit人破伤风抗体(TetanusAb)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠椎体终板软骨细胞豚鼠血清(NO)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

豚鼠纤溶酶抗纤溶酶复合物(PAP)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

豚鼠晚期糖基化终末产物(AGEs)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

豚鼠特异性免疫球蛋白E（sIgE）检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装