老哥俱乐部

细胞简介：

扁桃体是一对扁卵圆形的器官，位于扁桃体窝内
。扁桃体前下部分被子腭舌弓遮盖，其上端未被覆盖的部分由结缔组织构成的扁桃体体囊包绕，此囊仅借疏松结缔组织与咽肌相连。

扁桃体成纤维细胞主要位于扁桃体被膜中
，这是一层致密的结缔组织
，它把腭扁桃体与邻近器官隔开，有阻止腭扁桃体感染扩散的屏障作用。

细胞特性：

1）细胞来源于人的正常扁桃体组织

。

2）细胞鉴定：纤维连接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）荧光染色为阳性。

3）经鉴定细胞纯度高于90%。

4）不含有 HIV-1、 HBV
、HCV、支原体、、酵母和
。

5）细胞生长方式

：长梭状细胞，贴壁培养

。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 delf 原代成纤维细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告：

一、分离与培养
：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基

，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3

、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下

，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min

，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意

： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿

。

公司正在出售的产品：

大鼠P27蛋白(P27)检测试剂盒 ，英文名
： P27 ELISA Kit

Mouse dopamine (DA) ELISA Kit 小鼠多巴胺(DA)检测试剂盒

ELISA 小鼠Toll样受体-2(mouse TLR-2)  进口分装

CLIAKitforIfi205(Humanierferonactivatedgene205)ELISAKit人干扰素活化基因205

通用型人体腺病毒(adenovirus)定性检测试剂盒20次

ELISAKitHABP大鼠透明质酸结合蛋白

LAMP1重组大鼠 LAMP1 / CD107a 蛋白 (Fc 标签) Protein

glycoprotein (E1 glycoprotein 0.5mgglycoprotein (E1 glycoprotein) [Rubella virus] 风疹病毒糖蛋白多肽片段

DAPK1重组人 DAPK1 / DAP Kinase 1 蛋白 (aa 1-363, His & GST 标签) Protein

FKBP7 Protein Human 重组人 PPIase / FKBP7 蛋白 (Fc 标签)

SERPINA6 Protein Mouse 重组小鼠 SerpinA6 / CBG 蛋白

glycoprotein (E1 glycoprotein 0.5mgglycoprotein (E1 glycoprotein) [Rubella virus] 风疹病毒糖蛋白多肽片段

FKBP7 Protein Human 重组人 PPIase / FKBP7 蛋白 (Fc 标签)

LAMP1重组大鼠 LAMP1 / CD107a 蛋白 (Fc 标签) Protein

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DAPK1重组人 DAPK1 / DAP Kinase 1 蛋白 (aa 1-363, His & GST 标签) Protein

小鼠催乳素(PRL)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human carbonic anhydrase (CA) ELISA Kit 人酶(CA)检测试剂盒

HumanComplemefragme3a,C3aELISAKit 人补体片断3a(C3a)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanbasicfibroblastgrowthfactor4,bFGF-4检测试剂盒人碱性成纤维细胞生长因子4(bFGF-4)检测试剂盒规格：96T/48T

植物脂质比色法定量检测试剂盒20次

Humaestoterone，TELISAKit人睾同(T)检测试剂盒规格：96T/48T

人扁桃体成纤维细胞豚鼠生长激素检测试剂盒   豚鼠生长激素试剂盒   规格型号：96T/48T   豚鼠生长激素试剂盒
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豚鼠内皮型合成酶检测试剂盒   豚鼠内皮型合成酶试剂盒   规格型号：96T/48T   豚鼠内皮型合成酶试剂盒

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：检测试剂盒（进口分装）

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：2-8℃   保质期：6个月。