老哥俱乐部

细胞简介
：

单核细胞是血液中大的血细胞，是机体防御系统的一个重要组成部分
。与其他血细胞比较，单核细胞内含有更多的非特异性脂酶
，并且具有更强的吞噬作用。它通过吞噬和产生抗体等方式来抵御和消灭入侵的病原微生物。

单核细胞能吞噬异物产生抗体
，在机体损伤治愈
、抗御病原的入侵和对的方面起着重要的作用。机体发生炎症或其他都可引起单核细胞总数百分比发生变化，因此检查单核细胞计数成为辅助诊断的一种重要方法。在机体的防护
、和创伤愈治过程中起协同作用
。尽管它们是血液中的一类细胞成分，但它们功能的发挥
，更多地体现在循环管道外的器官组织中。在功能方面它们与这些器官组织中的许多细胞成分如巨噬细胞、肥大细胞
、成纤维细胞等密切相关
。

细胞特性：

1）细胞来源于外周血
。

2)细胞鉴定：MO-1或MO-2荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%
。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV
、支原体、、酵母和
。

5)细胞生长方式：半悬浮培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 DELF原代 巨噬 细胞培养体系 作为体外培养的培养基
。

实验报告
：

一
、分离与培养
：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化

；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养
；

5
、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min

，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5

、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照

。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后

，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流

。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况

，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品
：

大鼠神经元特异性烯醇化酶(NSE)检测试剂盒
，英文名
： NSE ELISA Kit

Mouse cytochrome C (Cyt-C) ELISA Kit 小鼠(Cyt-C)检测试剂盒

RatThromboxaneB2,TXB2ELISAKit 大鼠血栓素B2(TXB2)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHBsAb乙型肝表面抗体

细胞氨含量光谱法定量检测试剂盒20次

SheepIerleukin1,IL-1ELISAKit绵羊白介素1(IL-1)检测试剂盒规格：96T/48T

IFNA2重组小鼠 IFNA2 / Interferon alpha 2 蛋白 (Fc 标签) Protein

白细胞激活黏附因子(ALCAM)重组蛋白 Recombinant Activated Leukocyte Cell Adhesion Molecule (ALCAM)

PDGFRB重组人 PDGFRB / PDGFR-1 / CD140b 蛋白 Protein

FLRT2 Protein Human 重组人 FLRT2 蛋白

IFNA2 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 IFNA2 / Interferon alpha 2 蛋白

Annexin Ⅲ peptide 膜粘连蛋白A3抗体 0.5mgAnnexin Ⅲ peptide 膜粘连蛋白A3抗体

FLRT2 Protein Human 重组人 FLRT2 蛋白

GPA33重组小鼠 GPA33 / Glycoprotein A33 蛋白 Protein

C Protein Rat 重组大鼠 C / SLAMF2 / BCM1 蛋白

KDR重组人 VEGFR2 / Flk-1 / CD309 / KDR 蛋白 (His & GST 标签) Protein

小鼠促肾上腺皮质激素(ACTH)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat coisol (Coisol) ELISA Kit 大鼠(Coisol)检测试剂盒

Human15-lipoxygenase,15-LO/LOXELISAKit 人15脂加氧酶(15-LO/LOX)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

humanB-cellleukemia/lymphoma3,Bcl3检测试剂盒人B细胞淋巴瘤因子3(Bcl3)检测试剂盒规格
：96T/48T

植物种子高质化叶绿体分离试剂盒10次

Humaelomerase，TEELISAKit人端粒酶(TE)检测试剂盒规格：96T/48T

人单核细胞豚鼠卵清蛋白特异性IgE(OVAsIgE)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

豚鼠降钙素基因相关肽(CGRP)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

豚鼠基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

豚鼠基质金属蛋白酶9(MMP-9)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装