老哥俱乐部

培养操作步骤 ：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净
，不要用纱布
； 
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中
； 
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天
，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 

下列是产品的订购信息：

细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况
，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH
、温度

、氧气
、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制

，同时，可以施加化学、物理
、生物等因素作为条件而进行实验观察
，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后
，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察
、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜
、电子显微镜、流式细胞术
、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
​
实验要点及说明
：
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法

； 
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理； 
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻； 
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大

，以避免培养液的浪费和增加污染机率； 
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

细胞培养方法：
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清
，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞
，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化
；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清
；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中
。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化

，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min
，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基
。
3
、细胞冻存
：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次
，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后
，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化
；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min
，弃上清

，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒
，放入-80℃冰箱
，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

大鼠成年表皮角质形成层细胞*培养基100mL

人骨髓间充质干细胞（hMSCs）A-375 [A375], 人恶性黑素瘤细胞株

SY5Y/神经母细胞瘤细胞株国产

类(TPS)重组蛋白Recombinant Tryptase (TPS)

BC3H1(小鼠脑瘤细胞)5×106cells/瓶×2

泡盛曲霉 Aspergillus awamori大鼠卵巢成纤维细胞*培养基

人十二指肠腺细胞HuTu-80

大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicumMEF, 小鼠胚胎成纤维细胞

TMP琼脂培养基/TMP Agar金黄色葡萄球菌的分离培养250克国产/进口

植物杆菌 Lactobacillus plantarum小鼠胰腺上皮细胞*培养基

小鼠破骨细胞*培养基100mL

GH3细胞，大鼠埀体瘤细胞规格波形蛋白（抗原）Vimentin 0.5mg

VSIG4 T淋巴细胞负调节蛋白之一（抗原）VSIG4 (V-set and immunoglobulin domain-containing protein 4) 0.5mg

一种新的/激酶家族成员的基因WNK4（多肽抗原）WNK4(Ser/Thr-protein kinase WNK4; protein kinase with no lysine 4; protein kinase, lysine –dficient 4) 0.5mg

锌指蛋白300(抗原)ZNF300 (zinc finger protein ZNF300)- middle 0.5ml

锌指脂蛋白-1a(抗原)ZNF268 (zinc finger protein ZNF268)- N-terminal (1a) 0.5mg

人锌指脂蛋白-1c(抗原)ZNF268 (zinc finger protein ZNF268)- middle (1c) 0.5mg

锌指脂蛋白-1b(抗原）ZNF268 (zinc finger protein ZNF268)- middle (1b) 0.5mg

干扰素-γ多肽抗原（大、小鼠）IFN- Gamma(Interferon Gamma)Ag-mouse、rat 0.5mg

干扰素-β抗原IFN- Beta (Interferon Beta)Anti-mouse,rat 0.5mg

干扰素-β抗原IFN- Beta (Interferon Beta) human 0.5mg

前列腺干细胞抗原PSCA 0.5mg