老哥俱乐部

细胞简介：

颈位于下部
，近似圆锥体
，长 2.5～75px
，上端与体相连，下端深入。宫颈的大小与宫体比例随年龄及状态等而变化。宫颈壁由黏膜、肌层和外膜组成
。其中，外膜是由成纤维细胞构成。

细胞特性：

1）细胞来源于人正常组织

。

2)细胞鉴定：波形蛋白（Vimentin）荧光染色为阳性
。

3)经鉴定细胞纯度高于90%
。

4)不含有 HIV-1、 HBV
、HCV、支原体、、酵母和。

5)细胞生长方式：长梭形
，不规则细胞，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 Delf原代成纤维细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清

，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定
：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次

，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5

、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

小鼠碱性成纤维细胞生长因子9(FGF9)elisa检测试剂盒

17羟孕酮(17-OHP)elisa分析检测试剂盒

饮料阿斯巴塘（aspartame）含量高效液相色谱法定量检测试剂盒

动物组织超氧化物歧化酶（SOD）亚型制备试剂盒

精含量测试盒

神经组织特异性F肌动蛋白结合蛋白2抗体  Anti-Spinophilin/Neurabin 2

环指蛋白211抗体  Anti-RFPL4B/RNF211

GSK3B相互作用蛋白抗体  Anti-Ninein/GSK3B interacting protein

WD重复膜蛋白19抗体  Anti-WDR19

转录激活因子MYB抗体 MYB

转录阻抑蛋白CTCF抗体 CTCF

过氧化物酶体膜蛋白2抗体 PXMP2

核受体蛋白NR2E3抗体 NR2E3

NCK衔接蛋白1抗体 Nck1

N-α-乙酰转移酶40抗体 NAA40

乳腺癌易感基因复合物亚基蛋白3抗体 BRCC3

神经丛蛋白A2抗体 Plexin A2

DDX4抗体 DDX4

DNA拓普西异构酶ⅡA抗体 TOP2A

磷酸化蛋白激酶B重组兔单克隆抗体 phospho-Akt (Thr450)

磷酸化减数分裂重组蛋白REC8源物抗体 phospho-REC8 (Ser251)

胞吞再循环相关衔接蛋白CENTB1抗体 CENTB1/ACAP1

补体C9a抗体 Complement component C9a

线粒体融合蛋白1抗体 Mitofusin 1

锌指蛋白544抗体 ZNF544

17羟孕酮(17-OHP)elisa生化检测试剂盒

17-OHP ELISA kit

人白介素4受体(IL4R/CD124)elisa生化检测试剂盒

人宫颈成纤维细胞IL4R/CD124ELISAKit