老哥俱乐部

细胞简介
：

骨的微循环系统是骨微环境的重要组成部分，是骨内物质交换，向骨及骨内其它细胞运送养料和排除废物的主要场所

。通常，微循环血流能满足骨内各种组织代谢需要，使骨内各种细胞功能得以正常进行

。

骨微血管内皮细胞构成了骨内微血管的内衬，其不仅仅是血管与周围组织之间的屏障
，也与其它器官微血管内皮细胞一样
，对局部骨组织代谢具有重要的调控作用
，参与了许多骨的病理生理过程，再骨吸收

、新骨的形成
、血管再生
、营养物质转运、骨内代谢产物输出及维持骨内微环境平衡方面具有重要作用
。

细胞特性

：

1）细胞来源于人正常骨组织
。

2）细胞鉴定
：血管假性血友病因子（vWF）荧光染色为阳性
。

3）经鉴定细胞纯度高于90%。

4）不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、、酵母和
。

5）细胞生长方式：上皮样
，多角形细胞
，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 delf原代 内皮 细胞培养体系 作为该细胞的培养基。

实验报告：

一、分离与培养
：

1

、无菌条件下

，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液

，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品：

大鼠分泌型卷曲相关蛋白4(SFRP4)检测试剂盒 ，英文名： SFRP4 ELISA Kit

Rat betacellulin (BTC) ELISA Kit 大鼠β细胞素(BTC)检测试剂盒

Ratansforminggrowthfactorα,TGF-αELISAKit 大鼠转化生长因子α(TGF-α)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforDPPIVELISAKit大鼠二肽基肽酶Ⅳ

细胞葡萄糖激酶(glucosekinase)比色法定量检测试剂盒20次

Rathepaticlipase,HLELISAKit大鼠肝脂酶(HL)检测试剂盒

IL1A重组人 IL-1 alpha / IL1A / IL1F1 蛋白 Protein

松弛肽(RLN)重组蛋白 Recombinant Relaxin (RLN)

NCAM2重组人 NCAM2 / Neural cell adhesion molecule 2 蛋白 (His 标签) Protein

ACBD6 Protein Human 重组人 ACBD6 蛋白 (His 标签)

HA Protein H5N1 重组甲型流感 H5N1 (A/Cambodia/R0405050/2007) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 标签)

松弛肽(RLN)重组蛋白 Recombinant Relaxin (RLN)

ACBD6 Protein Human 重组人 ACBD6 蛋白 (His 标签)

IL1A重组人 IL-1 alpha / IL1A / IL1F1 蛋白 Protein

HA Protein H5N1 重组甲型流感 H5N1 (A/Cambodia/R0405050/2007) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 标签)

NCAM2重组人 NCAM2 / Neural cell adhesion molecule 2 蛋白 (His 标签) Protein

植物(ETH)ELISA 试剂盒

Human ai parainfluenza virus IgM aibody (ai-PIV IgM) ELISA Kit 人抗副流感病毒IgM抗体(ai-PIV IgM)检测试剂盒

PorcineImmunoglobulinG,IgGELISAKit 猪免疫球蛋白G(IgG)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforAFUELISAKit大鼠αL岩藻糖苷酶

血液唾液酸(SA)比色法定量检测试剂盒50次

MouseThyroid-Peroxidase,TPOELISAKit小鼠甲状腺过氧化物酶(TPO)检测试剂盒

人骨微血管内皮细胞匀浆制作或抽提   Homogenate production or exaction

（皮肤骨骼肌肠肌肉等难匀特殊样品）   (the skin and skeletal muscle and other hard uniform special sample)

超氧化物歧化酶（SOD）检测   Superoxide dismase (SOD) detection

二（MDA）检测   Malondialdehyde (MDA) detection

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞

，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养

。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决

。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。