老哥俱乐部

细胞简介
：

人眼结膜下囊成纤维细胞来自于眼结膜下囊组织，结膜囊由睑结膜、球结膜和穹窿结膜所形成的潜在性囊状腔隙
，囊开口于睑裂，眼睑闭合即囊口的闭合
。

细胞特性
：

1） 组织来源于人的眼球下囊组织。

2) 细胞鉴定
：波形蛋白（Vimentin）荧光染色为阳性
。。

3) 经鉴定细胞纯度高于90%。

4) 不含有 HIV-1
、 HBV
、HCV、支原体、

、酵母和。

5) 细胞生长方式
：长梭形细胞
，不规则细胞
，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 Delf原代成纤维细胞培养体系 作为体外培养的培养基
。

实验报告
：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清

，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4

、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5
、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定
：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min

，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜


；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗

， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

注意事项

：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态

，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

小鼠αN已酰基葡糖苷酶(αNAG)ELISA 试剂盒

Rat aquaporin 3 (AQP-3) ELISA Kit 大鼠水通道蛋白3(AQP-3)检测试剂盒

Humanplacealactogen,HPLELISAKit 人胎盘催乳素(HPL)检测试剂盒 进口分装

HumanChromogranin,CgA检测试剂盒人嗜铬蛋白A(CgA)检测试剂盒

总脂肪酶(lipase)定量检测试剂盒50次

Humansalivaryductaoaibody,SDAELISAKit人抗唾液腺导管组织抗体(SDA)检测试剂盒

ANGPTL4重组小鼠 ANGPTL4 蛋白 (His 标签) Protein

基质金属蛋白酶26(MMP26)重组蛋白 Recombinant Matrix Metalloproteinase 26 (MMP26)

SIGLEC6重组人 SIGLEC6 / CD327 蛋白  Protein

ACVR2A Protein Human 重组人 ACVR2 / ACTRII / ACVR2A 蛋白 (His 标签)

IL12B Protein Marmoset 重组绒猴 IL12B / IL-12B 蛋白

基质金属蛋白酶26(MMP26)重组蛋白 Recombinant Matrix Metalloproteinase 26 (MMP26)

ACVR2A Protein Human 重组人 ACVR2 / ACTRII / ACVR2A 蛋白 (His 标签)

ANGPTL4重组小鼠 ANGPTL4 蛋白 (His 标签) Protein

IL12B Protein Marmoset 重组绒猴 IL12B / IL-12B 蛋白

SIGLEC6重组人 SIGLEC6 / CD327 蛋白  Protein

植物B12(VB12)ELISA 试剂盒

Human ai somatic muscle aibody (ASA) ELISA Kit 人抗骨骼肌抗体(ASA)检测试剂盒

PorcineVascuolarcelladhesionmolecule1,VCAM-1ELISAKit 猪血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforAFP甲胎蛋白定量(一/二步夹心法)

血液血管紧张素Ⅰ转化酶1(ACE1)活性荧光定量检测试剂盒20次

MouseTestoterone,TELISAKit小鼠睾同(T)检测试剂盒

人结膜下囊成纤维细胞脂肪型脂肪酸结合蛋白 (FABP4)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

凋亡相关因子 (Fas/Apo-1)   作用
：   ELISA   规格：      进口分装

凋亡相关因子配体 (Fas-L)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

胎球蛋白 -A(Fetuin-A)   作用

：   ELISA   规格：      进口分装