老哥俱乐部

细胞简介
：

滑膜是关节囊的内层，淡红色，平滑闪光，薄而柔润，由疏松结缔组织组成。关节腔内的所有结构，除关节软骨、半月软骨板以外 ,即便是通过关节腔的肌腱、韧带等均全部为滑膜所包裹
。

滑膜分泌滑液，在关节活动中起重要作用
。正常滑膜分为两层，即薄的细胞层 (内腔层)和血管层(内膜下层)，是血管丰富的关节囊内膜
，贴附于非关节面部分，覆盖于关节囊内的骨面上，不在软骨面上，此部分称为边缘区或裸区。滑膜呈粉红色，光滑发亮
、湿而润滑，有时可见绒毛
，内含胶原性纤维。

滑膜细胞有 A、B两型。巨噬细胞样A型细胞，表面有丝状伪足、浆膜内陷、囊泡、线粒体
、溶酶体、胞浆纤维和高尔基体
，具有吞噬功能；B型成纤维样滑膜细胞(FLS) ，有高浓度的内质网结构，是介导 RA 关节破坏的主要细胞
。

细胞特性：

1）细胞来源于手术取得的患类风湿性关节炎病人的关节滑膜组织


。

2)细胞鉴定
：纤维连接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1
、 HBV、HCV、支原体、
、酵母和。

5)细胞生长方式：成纤维样细胞，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 Delf原代成纤维细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告
：

一
、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液

，自然沉淀并收集上清

，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶

，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定

：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基

，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5

、PBS冲洗细胞3次
，每次10min
，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6

、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化

，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞

，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

小鼠氧化低密度脂蛋白(OxLDL)ELISA 试剂盒

Rat apoptosis related factor (FAS/CD95) ELISA Kit 大鼠凋亡相关因子(FAS/CD95)检测试剂盒

Human1,3-βDglucosidaseELISAKit 人1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βDglucosidase)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitfor1,3-BetaD-Glu(Human1,3-BetaDglucosidase)ELISAKit人1,3-βD葡葡糖苷酶

饮料糖精(saccharin)含量比色法定量检测试剂盒20次

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ADA Protein Human 重组人 ADA / Adenosine deaminase 蛋白 (His 标签)

C Protein Human 重组人 C / SLAMF2 / BCM1 蛋白 (His 标签)

PERK(PRKR-like endoplasmic reticulum kinase 0.5mgPERK(PRKR-like endoplasmic reticulum kinase) 蛋白激酶R样内质网激酶抗原

ADA Protein Human 重组人 ADA / Adenosine deaminase 蛋白 (His 标签)

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植物D2(VD2)ELISA 试剂盒

Human ai liver cell membrane aibody (LMA) ELISA Kit 人抗肝细胞膜抗体(LMA)检测试剂盒

PorcineSomatostatin,SSELISAKit 猪(SS)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforAFP(MouseAlpha-fetoprotein)ELISAKit小鼠甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白

血液纤维蛋白溶酶原激活剂抑制物(PAI)活性化学发光法定量检测试剂盒20次

Mousethrombin-aithrombincomplex,TATELISAKit小鼠抗复合物(TAT)检测试剂盒

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：2-8℃   保质期
：6个月
。

鱼类状腺原酸检测试剂盒   鱼类状腺原酸试剂盒   规格型号：96T/48T   鱼类状腺原酸试剂盒，规格型号：96T/48T

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。