老哥俱乐部

细胞简介：

毛囊是包围在毛发根部的囊状组织，内层是上皮组织性毛囊，外层是结缔组织性毛囊，内层与表皮相连，外层则与真皮相连
。

毛囊作为一种重要的皮肤附属器官，为显著的特点是始终处于生长期、退行期和休止期的周期性循环中。在毛囊的形态学和周期性循环中
，毛囊的角质细胞作为一种特殊类型的角质形成细胞，受毛细胞分泌的一些细胞因子或信号因子等作用，迅速发生分化增殖或凋亡，进而诱导毛囊进入生长期或退行期
。

细胞特性：

1）细胞来源于人头皮组织
。

2)细胞鉴定：广谱角蛋白((PCK)荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV
、HCV
、支原体

、


、酵母和。

5)细胞生长方式：上皮样细胞，贴壁培养。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 delf 原代 角质形成 细胞培养体系 作为体外培养原代肠微血管内皮细胞的培养基。

实验报告
：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后

，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养

；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min

，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次

，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min

，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

P-PKCELISAKit

大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)elisa分析检测试剂盒

NAG ELISA Kit

人骨碱性磷酸酶(BALP)elisa分析检测试剂盒

BALPELISAKit

人肺表面活性物质相关蛋白C(SP-C)elisa检测试剂盒

酵母电击感受态细胞制备试剂盒

鱼类甲状腺素(T4)elisa检测试剂盒免费代测

大鼠双氧化酶2(DUOX2)elisa检测试剂盒

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丙氨基转移酶(ALT)elisa分析检测试剂盒

冰冻切片中性脂质尼罗红染色试剂盒

ATP合酶亚基O抗体

OSCP

CDK5和ABL1酶底物1抗体

CABLES1

DNA拓普西异构酶Ⅱ抗体  Anti-TOPO II/TOPO II Alpha

配对盒基因7抗体  Anti-PAX7

肝磷酸酯酶1抗体  Anti-PRL1/PTP4A1

丝/精相关核基质蛋白2抗体  Anti-SRRM2

辣根过氧化物酶标记的小鼠抗羊IgG H&L

鱼促甲状腺素(TSH)elisa生化检测试剂盒

TSH ELISA Kit

人丙酰A羧化酶β多肽(PCCB)elisa生化检测试剂盒

人毛囊角质细胞HumanPCCBELISAKit

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系

。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例

、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面

，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片

，是正常现象

。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用

。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。