老哥俱乐部

细胞简介
：

脑血管周细胞分布于脑组织的微血管系统中
，调节血管形成、稳定和功能的关键因素。周细胞典型的特征是有一个突出的核，核周围胞浆较少，有许多平行于微血管长轴的突起，这些突起逐渐变细并包绕微血管腔，起到对管腔的支持作用。

同时
，一个周细胞可以通过伸展的突起与微循环中的多个接触。此外
，周细胞和内皮细胞间的相互作用在血管新生中具有极为重要的作用
。

细胞特性：

1）组织来源于人的正常脑组织
。

2）细胞鉴定：平滑肌肌动蛋白（α-SMA）与NG2荧光染色为阳性。

3）经鉴定细胞纯度高于90%。

4）不含有 HIV-1
、 HBV
、HCV
、支原体
、
、酵母和
。

5）细胞生长方式：长梭形细胞

，不规则细胞
，贴壁培养
。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 Delf原代 周 细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养
；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养


；二
、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次

，每次10min

，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

铽盐（terbiumIII）单链DNA荧光定量测定试剂盒

体液羟赖（HYL）含量比色法定量检测试剂盒

人球蛋白A（IgA）elisa检测试剂盒

大鼠甲状旁腺相关蛋白(PTHrP)elisa分析检测试剂盒

猪骨特异性碱性磷酸酶B(ALP-B)elisa分析检测试剂盒

豚鼠神经蛋白聚糖(NCAN)elisa分析检测试剂盒

酵母菌SD-LEU培养基

鱼球蛋白M(IgM)elisa检测试剂盒

大鼠松弛素relaxin,RLNelisa检测试剂盒

神经营养因子抗体 Neurturin

食道癌相关基因NMES1抗体 NMES1

NSUN5P1蛋白抗体 NSUN5P1

Pacific Blue标记小鼠CD117单克隆抗体 mouse CD117(c-Kit)/Pacific Blue

转录因子Sox3抗体 Sox3

组氨酶HAL抗体 Histidase

核孔复合体蛋白88抗体 NUP88

核因子活化T细胞胞浆蛋白2抗体 NFAT1

锌指蛋白342抗体 ZNF342

锌指蛋白720抗体 ZNF720

补体C1qα链多肽抗体 C1QA

成视网膜细胞瘤基因抗体 Rb

DNA聚合酶β抗体 DNA Polymerase beta

ECSIT蛋白抗体 ECSIT

磷酸化红细胞膜带4.9蛋白抗体 phospho-Dematin (Ser403)

磷酸化细胞骨架肌动蛋白样蛋白3抗体 phospho-ARP3 (Ser418)

小鼠铁调素(Hepc)elisa检测试剂盒

核黄素转运因子2(RFT2)elisa生化检测试剂盒

RFT2 ELISA Kit

人白介素1可溶性受体Ⅰ(IL-1sRⅠ)elisa生化检测试剂盒

人脑血管周细胞HumanIL-1sRⅠELISAkit

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液

、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后

，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况

，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代

。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。