老哥俱乐部

细胞简介：

膀胱癌是一种泌尿生殖系统肿瘤，发病率和死亡率较高

，膀胱癌分为非肌浸润性膀胱癌与肌肉浸润性膀胱癌。

肿瘤微环境理论认为
，肿瘤微环境与细胞外基质是肿瘤对化疗反应的重要决定因素。肿瘤微环境包括和非细胞，以及细胞外成分，在肿瘤复发和转移中起着重要的作用。其中，非细胞主要由肿瘤相关成纤维细胞构成。

成纤维细胞是实体瘤中主要的细胞，它们结合结缔组织的细胞外基质
，是组织结构完整性的基础。已有研究表明
，肿瘤相关成纤维细胞是肿瘤演进的重要促进剂
，它们可通过分泌一种或多种可溶性因子如细胞因子
、生长因子、趋化因子和基质降解酶等，肿瘤细胞响应这些可溶性因子作用，进而改变肿瘤细胞的生长方式机器发展演进过程
。

细胞特性：

1）细胞来源于手术切除的膀胱癌组织。

2)细胞鉴定：纤维连接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1
、 HBV、HCV
、支原体、、酵母和

。

5)细胞生长方式：成纤维样细胞

，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 delf 原代成纤维细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬

，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5

、差速贴壁1h后

，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定
：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品
：

大鼠1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD glucosidase)检测试剂盒
，英文名
： 1,3-βD glucosidase ELISA Kit

Mouse calcitonin (CT) ELISA Kit 小鼠降钙素(CT)检测试剂盒

MouseHelicobacterpyloriIgG,Hp-IgGELISAKit 小鼠幽门螺旋菌IgG(Hp-IgG)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforHumanplasmin-aiplasmincomplex,PAPELISAKit人纤溶酶抗纤溶酶复合物

通用型总脂蛋白(TotalL-Cholesterol)酶连续循环比色法定量检测试剂盒20次

ELISAKitIgE大鼠免疫球蛋白E

DPP4重组人 DPP4 / DPPIV / CD26 蛋白 Protein

趋化因子C-X-C-基元配体16(CXCL16)重组蛋白 Recombinant Chemokine C-X-C-Motif Ligand 16 (CXCL16)

CGA重组人 FSH alpha / TSH alpha / CGA 蛋白  Protein

GFRA3 Protein Human 重组人 GFRA3 / GFR-alpha-3 蛋白 (His 标签)

HA Protein Influenza B 重组乙型流感 (B/Brisbane/60/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 标签)

趋化因子C-X-C-基元配体16(CXCL16)重组蛋白 Recombinant Chemokine C-X-C-Motif Ligand 16 (CXCL16)

GFRA3 Protein Human 重组人 GFRA3 / GFR-alpha-3 蛋白 (His 标签)

DPP4重组人 DPP4 / DPPIV / CD26 蛋白 Protein

HA Protein Influenza B 重组乙型流感 (B/Brisbane/60/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 标签)

CGA重组人 FSH alpha / TSH alpha / CGA 蛋白  Protein

小鼠白介素2可溶性受体β链(IL-2sRβ)ELISA 试剂盒

Human deoxypyridinoline / deoxypyridinoline (DPD) ELISA Kit 人脱氧酚/脱氧啉(DPD)检测试剂盒

HumaniggeringReceptorExpressesonMyeloidCells-1,EM-1ELISAKit 人髓系细胞触发受体-1(EM-1)检测试剂盒 进口分装

HumanCarbohydrateaigen19-9,CA19-9检测试剂盒人糖链抗原19-9(CA19-9)检测试剂盒

重组逆转录病毒载体转染试剂盒10次

HumansolubleFactor-relatedApoptosisligand,sFASL/Apo-1ELISAKit人可溶性凋亡相关因子配体(sFASL)检测试剂盒

人膀胱癌相关成纤维细胞兔子可溶性血管内皮细胞蛋白C受体检测试剂盒   兔子可溶性血管内皮细胞蛋白C受体试剂盒   规格型号：96T/48T   兔子可溶性血管内皮细胞蛋白C受体试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：兔子可溶性血管内皮细胞蛋白C受体试剂盒
、兔子可溶性血管内皮细胞蛋白C受体检测试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期
：6个月。

兔子睾检测试剂盒   兔子睾试剂盒   规格型号
：96T/48T   兔子睾试剂盒，规格型号
：96T/48T
，来源
：检测试剂盒（进口分装），产品别名：兔子睾试剂盒、兔子睾检测试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

兔子端粒酶检测试剂盒   兔子端粒酶试剂盒   规格型号


：96T/48T   兔子端粒酶试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：兔子端粒酶试剂盒
、兔子端粒酶检测试剂盒   保存条件

：2-8℃   保质期
：6个月。

兔子催乳素检测试剂盒   兔子催乳素试剂盒   规格型号：96T/48T   兔子催乳素试剂盒，规格型号：96T/48T
，来源：检测试剂盒（进口分装）
，产品别名：兔子催乳素试剂盒
、兔子催乳素检测试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期
：6个月。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例

、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h

。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意

： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。