老哥俱乐部

细胞简介：

脾是重要的器官
，有造血

、滤血、衰老血细胞及参与反应等功能。也是细胞迁移和接受抗原刺激后发生应到
、产生效应分子的重要场所。

脾脏作为机体大的器官
，占全身组织总量的 25%，含有大量的细胞和巨噬细胞
，是机体细胞和体液的中心，通过多种机制发挥抗肿瘤作用. 脾脏切除导致细胞和体液功能的紊乱，影响肿瘤的发生和发展
。

细胞特性
：

1）细胞来源于人正常脾脏组织。

2)不含有 HIV-1
、 HBV
、HCV、支原体
、、酵母和。

3)细胞生长方式
：细胞是混合体系，少量贴壁生长
，大部分悬浮生长。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 人原代脾外周血单个核细胞培养基 作为体外培养的培养基。

实验报告
：

一
、分离与培养：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小

；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3

、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗

，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min

，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象

。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养

。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

人结合珠蛋白/触珠蛋白(Hpt/HP)elisa分析检测试剂盒

人B7-H4 elisa分析检测试剂盒

20％中性Formalin固着液

小鼠基质金属蛋白酶9/明胶酶B(MMP-9/Gelatinase B)elisa分析检测试剂盒

大鼠层粘蛋白α1(LAMA1)elisa检测试剂盒

小鼠GATA结合蛋白4(GATA4)elisa分析检测试剂盒

咖啡阿斯巴塘（aspartame）含量高效液相色谱法定量检测试剂盒

超氧化物歧化酶（SOD）酵母/裂解样品制备试剂盒

水苏糖含量测试盒

丝蛋白酶37抗体 Protease serine 37

髓磷酯髓鞘蛋白1单克隆抗体 PLP1

PE标记人CD4单克隆抗体 Human CD4-PE

PSF2蛋白抗体 PSF2

19号染色体开放阅读框44抗体 C19orf44

20号染色体开放阅读框26抗体 C20orf26

磺基转移酶抗体1C2抗体 SULT1C2

肌球蛋白重链9抗体 MYH9

嗅觉受体52E1抗体 OR52E1

血红素抗体 Hemoglobin

蛋白激酶C mu型抗体 PRKD1/PKC mu

蛋白质磷酸酶2A亚基3抗体 PPP2R3

FAM58A蛋白抗体 FAM58A

FITC标记人/小鼠ZAP-70单克隆抗体 human/mouse ZAP-70/FITC

磷酸化周期蛋白依赖激酶抑制因子1C抗体 Phospho-p57 Kip2 (Thr310)

卵母细胞TRO抗体 Magphinin

汞离子检测试剂盒

粘附分子JAML蛋白抗体

JAML

载脂蛋白C4抗体

人脾外周血单个核细胞APOC4