老哥俱乐部

细胞简介
：

树突状细胞（ Dendritic cells, DC）是机体功能强的专职抗原递呈细胞，它能高效地摄取
、加工处理和递呈抗原，未成熟DC具有较强的迁移能力，成熟DC能有效激活初始型T细胞，处于启动
、调控、并维持应答的中心环节。

DC的来源有两条途径

：①髓样干细胞在GM-CSF的刺激下分化为DC
，称为髓样DC，也称DCl
，与单核细胞和粒细胞有共同的前体细胞
；包括朗格汉斯细胞，间皮（或真皮）DCs以及单核细胞衍生的DCs等

，②来源于样干细胞
，称为样DC或浆细胞样DC，即DC2，与T细胞和NK细胞有共同的前体细胞。

树突状细胞 (DC)表面具有丰富的抗原递呈分子、共刺激因子和粘附因子，是功能强大的专职抗原递呈细胞(APC)。DC自身具有刺激能力，是目前发现的惟一能激活未致敏的初始型T细胞的APC
。

细胞特性：

1）细胞来源于脐血。

2)细胞鉴定
：CD11c荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、、酵母和。

5)细胞生长方式
：半悬浮细胞。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 Delf原代 树突状（ DC） 细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告：

一


、分离与培养
：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min

，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min

；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min

；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次

，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态

，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品
：

人组织因子途径抑制物(TFPI)ELISA 试剂盒

Rat apolipoprotein B100 (apo-B100) ELISA Kit 大鼠载脂蛋白B100(apo-B100)检测试剂盒

Humanai-hepatitisDvirusaibody,ai-HDVELISAKit 人抗丁型肝病毒抗体(ai-HDV)检测试剂盒 进口分装

HumanHeatShockProtein60,HSP-60检测试剂盒人热休克蛋白60(Hsp-60)检测试剂盒

组织副氏菌A(SalmonellaParatyphiA)定量PCR扩增检测试剂盒20次

HumanMaixmetalloproteinase3,MMP-3ELISAKit人基质金属蛋白酶3(MMP-3)检测试剂盒

ERBB3重组人 HER3 / ErbB3 蛋白  Protein

三叶因子1(TFF1)重组蛋白 Recombinant Trefoil Factor 1 (TFF1)

DHRS9重组人 DHRS9 蛋白 (His 标签) Protein

ADH7 Protein Human 重组人 CAMK2A / CAMKA 蛋白 (GST 标签)

HA Protein H5N1 重组甲型流感 H5N1 (A/VietNam/1203/2004) 血凝素HA2 (Hemagglutinin) 蛋白

三叶因子1(TFF1)重组蛋白 Recombinant Trefoil Factor 1 (TFF1)

ADH7 Protein Human 重组人 CAMK2A / CAMKA 蛋白 (GST 标签)

ERBB3重组人 HER3 / ErbB3 蛋白  Protein

HA Protein H5N1 重组甲型流感 H5N1 (A/VietNam/1203/2004) 血凝素HA2 (Hemagglutinin) 蛋白

DHRS9重组人 DHRS9 蛋白 (His 标签) Protein

植物纤维素酶(CE)检测试剂盒

Human ai calmodulin specific aibody (CAM-ab) ELISA Kit 人抗钙调素特异抗体(CAM-ab)检测试剂盒

Porcineendothelin1,ET-1ELISAKit 猪内皮素1(ET-1)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforAFP-L3ELISAKit小鼠小扁结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体3

血液A含量比色法定量检测试剂盒20次

Mousethyroidstimulatinghormonereceptoraidoby,AbELISAKit小鼠抗促甲状腺素受体抗体(Ab)检测试剂盒

人脐血DC细胞植物激素脱落酸（ABA）ELISAKit   ELISA. 

植物K1(VK1)ELISAKit   ELISA. 

植物B12(VB12)ELISAKit   ELISA. 

植物A(VA)ELISAKit   ELISA.