老哥俱乐部

细胞简介
：

食管癌是常见的六大恶性肿瘤之一，而我国是高发区之一
。食管癌是发生在食管上皮组织的恶性肿瘤。细胞主要呈多角形，大小不等，胞浆丰富，胞核呈圆形或卵圆形
，大小不等。此外，有研究表明，大部分来自于上皮的肿瘤细胞中均存在角蛋白
。

肿瘤相关成纤维细胞是肿瘤微环境中主要的细胞成分之一，在肿瘤的发生、发展中起着重要作用
。

细胞特性：

1）细胞来源于人食管癌组织。

2）细胞鉴定
：波形蛋白（Vimentin）荧光染色为阳性。

3）不含有 HIV-1、 HBV
、HCV
、支原体
、
、酵母和。

4）细胞生长方式：长梭形，不规则细胞，贴壁培养
。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 delf 原代成纤维细胞培养体系 作为体外培养的培养基
。

实验报告：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小

；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min


，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3

、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min

，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1

：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清

。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1

：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

大鼠神经型合酶(NOS1)检测试剂盒 ，英文名
： NOS1 ELISA Kit

Mouse cyclin D2 (Cyclin-D2) ELISA Kit 小鼠细胞周期素D2(Cyclin-D2)检测试剂盒

RatVitaminC,VCELISAKit 大鼠C(VC)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforHB-EGF(Humanheparin-bindingepidermalgrowthfactor-likegrowthfactor)ELISAKit人肝素结合性表皮生长因子

细胞半胱(cysteine)含量比色法定量检测试剂盒20次

Ricinuscommunisagglinin,RCAELISAKit蓖麻凝集素(RCA)检测试剂盒

PLAT重组人 tPA / PLAT 蛋白 Protein

信号素3E(SEMA3E)重组蛋白 Recombinant Semaphorin 3E (SEMA3E)

VMO1重组人 VMO1 蛋白  Protein

FLT3 Protein Human 重组人 FLT-3 / CD135 / FLK-2 蛋白 (His 标签)

HA Protein H5N1 重组甲型流感 H5N1 (A/Anhui/1/2005) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 标签)

信号素3E(SEMA3E)重组蛋白 Recombinant Semaphorin 3E (SEMA3E)

FLT3 Protein Human 重组人 FLT-3 / CD135 / FLK-2 蛋白 (His 标签)

PLAT重组人 tPA / PLAT 蛋白 Protein

HA Protein H5N1 重组甲型流感 H5N1 (A/Anhui/1/2005) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 标签)

VMO1重组人 VMO1 蛋白  Protein

小鼠促甲状腺素(TSH)ELISA 试剂盒

Rat osteoclast differeiation factor (ODF) ELISA Kit 大鼠破骨细胞分化因子(ODF)检测试剂盒

Humanai-phospholipidaibody,Apl/APAELISAKit 人抗0脂抗体(Apl/APA)检测试剂盒 进口分装

Humanbetacellulin,BTC检测试剂盒人β细胞素(BTC)检测试剂盒

植物种子甲磺酸乙脂突变诱导试剂盒3次

Humaargetedribonuclease,ELISAKit人靶向核糖核酸酶()检测试剂盒

人食管癌相关成纤维细胞豚鼠超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒     试剂盒   组装/原装

豚鼠肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)检测试剂盒     试剂盒   组装/原装

豚鼠表皮生长因子(EGF)检测试剂盒     试剂盒   组装/原装

豚鼠白三烯D4(LTD4)检测试剂盒     试剂盒   组装/原装