老哥俱乐部

细胞简介
：

神经胶质细胞广泛分布于神经系统内，是除了神经元以外的所有细胞，在神经系统中数量大约是神经元的十倍。具有支持
、滋养神经元的作用。胶质细胞与神经元一样也具有细胞凸起，但其胞质凸起不分树突和轴突。

星形胶质细胞
，是胶质细胞中体积大的一种。从胞体发出许多长而分支的突起
，伸展充填在神经细胞的胞体及其突起之间，起支持和分隔神经细胞的作用。

细胞特性：

1）组织来源于人的正常脑组织
。

2)细胞鉴定：神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)荧光染色法

。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1

、 HBV、HCV、支原体

、、酵母和
。

5)细胞生长方式
：梭形细胞，贴壁培养。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 Delf原代 星形胶质 细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告：

一、分离与培养
：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液

，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养

；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min

，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞

，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片

，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况

，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品
：

大鼠血小板因子4(PF4)检测试剂盒 ，英文名： PF4 ELISA Kit

Mouse coagulation factor VIII related aigen (F VIII -Ag) ELISA Kit 小鼠Ⅷ相关抗原(FⅧ-Ag)检测试剂盒

Mousebasicfibroblastgrowthfactor9,bFGF-9ELISAKit 小鼠碱性成纤维细胞生长因子9(bFGF-9)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforHumanCollagenaseIELISAKit人胶原酶I

细胞CDK2/CYCLINE激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKitHGF大鼠肝细胞生长因子

CD83重组食蟹猴 CD83 蛋白  Protein

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IL21重组人 Interleukin-21 / IL-21 蛋白 Protein

GABARAPL2 Protein Human 重组人 GATE-16 / GABARAPL2 蛋白 (His 标签)

ITK Protein Mouse 重组小鼠 ITK Kinase 蛋白 (aa 351-619, His & GST 标签)

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小鼠表皮生长因子(EGF)ELISA 试剂盒

Rat fractalkine (FK) ELISA Kit 大鼠趋化因子(FK)检测试剂盒

Humanfocaladhesionkinase,FAKELISAKit 人黏着斑激酶(FAK)检测试剂盒 进口分装

Humanbrainnaiureticpeptide,BNP检测试剂盒人脑素/脑尿肽(BNP)检测试剂盒

植物组织膜性囊泡(vacuole)分离试剂盒20次

HumanSquamousCellCarcinomaAigen2,SCCAg2ELISAKit人鳞状上皮细胞癌抗原2(SCCAg-2)检测试剂盒

人星形胶质细胞兔子血栓调节蛋白(TM)ELISAKit   ELISA. 

兔子血纤蛋白原降解产物(FDP)ELISAKit   ELISA. 

兔子纤溶酶原激活物抑制因子(PAI)ELISAKit   ELISA. 

兔子纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)ELISAKit   ELISA.