老哥俱乐部

细胞简介
：

眼眶 (orbit)是容纳眼球等组织的类似四边锥形的骨腔，左右各一，互相对称
。眶深约4--5cm
。眼眶除外侧壁比较坚固外
，其它三壁骨质均菲薄。上壁与前颅凹，额窦;下壁与上颌窦;内侧壁与筛窦、鼻腔
，后方与蝶窦相邻。

细胞特性
：

1）组织来源于人的眼眶组织
。

2)细胞鉴定
：波形蛋白（Vimentin）荧光染色为阳性
。。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、、酵母和。

5)细胞生长方式

：长梭形细胞
，不规则细胞
，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 delf原代 成纤维 细胞培养体系 作为该细胞的培养基。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s
，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3

、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液

，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min

，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面


，显微镜下观察细胞状态

。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后

，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因

，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品

：

大鼠半胱酸蛋白酶抑制剂/胱抑素C(Cys-C)检测试剂盒
，英文名： Cys-C ELISA Kit

Mouse beta mannosidase (beta Manase) ELISA Kit 小鼠β甘露糖苷酶(β Manase)检测试剂盒

ELISA 小鼠Fractalkine(mouse Fractalkine)  进口分装

CLIAKitforISR-BetaELISAKit大鼠胰岛素受体β

通用型丁酰酯酶活性化学发光法定量检测试剂盒20次

ELISAKitTNFsR-Ⅱ大鼠肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅱ

F11R重组大鼠 JAM-A / F11R 蛋白 (His 标签) Protein

factor V(Vcoagulation factor 0.5mgfactor V(Vcoagulation factor) 5抗体

MIF重组人 MIF / GLIF 蛋白 (His 标签) Protein

GNG13 Protein Human 重组人 GNG13 蛋白 (His 标签)

CD209B Protein Mouse 重组小鼠 CD209B / DC-SIGNR1 蛋白 (His 标签)

factor V(Vcoagulation factor 0.5mgfactor V(Vcoagulation factor) 5抗体

GNG13 Protein Human 重组人 GNG13 蛋白 (His 标签)

F11R重组大鼠 JAM-A / F11R 蛋白 (His 标签) Protein

CD209B Protein Mouse 重组小鼠 CD209B / DC-SIGNR1 蛋白 (His 标签)

MIF重组人 MIF / GLIF 蛋白 (His 标签) Protein

小鼠白介素11(IL-11)ELISA 试剂盒

Rat neuroophin 3 (-3) ELISA Kit 大鼠神经营养因子3(-3)检测试剂盒

Humanosteonectin,ONELISAKit 人骨粘连蛋白(ON)检测试剂盒 进口分装

humancaspase4-apoptosis-relatedcysteinepeptidase,Casp4检测试剂盒人哆/哆醇B6激酶(PDXK)检测试剂盒

转基因水稻LibeyLink62品系试剂盒20次

humansimilaoRIKENcDNA4933429F08geneELISAKit人类似RIKENcDNA4933429F08基因检测试剂盒

人眼眶成纤维细胞兔子促甲状腺素(TSH)检测试剂盒     试剂盒   组装/原装

兔子促黄体激素(LH)检测试剂盒     试剂盒   组装/原装

兔子雌二醇(E2)检测试剂盒     试剂盒   组装/原装

兔子肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)检测试剂盒     试剂盒   组装/原装