老哥俱乐部

细胞简介
：

羊水源的干细胞来自于发育中的胎儿
，主要来源于胎儿及附属组织
，具有增殖能力强，分化潜能高和原性低等特点。

羊水中的细胞来源于胎儿和羊膜脱落细胞，这些细胞形成于胚胎发育早起

，部分保存着胚胎原始细胞的特性。

细胞特性：

1）细胞来源于人正常羊水组织。

2)细胞鉴定
：CD44荧光染色为阳性，CD45荧光染色为阴性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1

、 HBV、HCV、支原体、
、酵母和。

5)细胞生长方式
：长梭状细胞，贴壁培养
。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 delf原代 间充质干 细胞培养体系 作为该细胞的培养基。

实验报告：

一、分离与培养
：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬

，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养

；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

小鼠骨胶原交联(Cr)ELISA 试剂盒

Rat annexin V (ANX- V) ELISA Kit 大鼠膜联蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)检测试剂盒

Humansecretieceptor,SRELISAKit 人促胰液素/分泌素受体(SR)检测试剂盒 进口分装

Humanai-Reticulinaibody,ARA检测试剂盒人抗网硬蛋白抗体(ARA)检测试剂盒

植物细胞原生质体电转试剂盒10次

HumaumornecrosisfactorsolublereceptorⅡ,TNFsR-ⅡELISAKit人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)检测试剂盒

OPCML重组小鼠 OBCAM / OPCML 蛋白 (His 标签) Protein

饥饿素-O-乙酰基转移酶(GOAT)重组蛋白 Recombinant Ghrelin-O-Acyltransferase (GOAT)

IL12A & IL27B重组人 IL12A & IL27B Heterodimer 蛋白 Protein

AIM2 Protein Human 重组人 AIM2 蛋白 (GST 标签)

CX3CL1 Protein Canine 重组狗 Fractalkine / CX3CL1 蛋白

饥饿素-O-乙酰基转移酶(GOAT)重组蛋白 Recombinant Ghrelin-O-Acyltransferase (GOAT)

AIM2 Protein Human 重组人 AIM2 蛋白 (GST 标签)

OPCML重组小鼠 OBCAM / OPCML 蛋白 (His 标签) Protein

CX3CL1 Protein Canine 重组狗 Fractalkine / CX3CL1 蛋白

IL12A & IL27B重组人 IL12A & IL27B Heterodimer 蛋白 Protein

猪白介素1(IL-1)ELISA 试剂盒

Human ai SS-B/La aibody ELISA Kit 人抗SS-B/La抗体检测试剂盒

Porcineierleukin2,IL-2ELISAKit 猪白介素2(IL-2)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforAhR(Humanarylhydrocarboeceptor)ELISAKit人芳香烃受体

血液牛病毒性腹泻病毒(BovineViralDiarrhoeaVirus;BVDV)定性试剂盒20次

MouseTumornecrosisfactorβ,TNF-βELISAKit小鼠坏死因子β(TNF-β)检测试剂盒

人羊水干细胞中文名称   方法   规格

大鼠Ⅱ型胶原(ColⅡ)ELISAKit   ELISA. 

大鼠C(VC)ELISAKit   ELISA. 

大鼠B6(VB6)ELISAKit   ELISA.

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决

。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。