老哥俱乐部

细胞简介：

气管以软骨、肌肉、结缔组织和粘膜构成。软骨为 C字形的软骨环

，缺口向后，各软骨环以韧带连接起来，环方缺口处由平滑肌和致密结缔组织连接，保持了持续张开状态。

支气管 (bronchi)，是指由气管分出的各级分枝

，由气管分出的一级支气管
，即左
、右主支气管。气管管壁分黏膜

，黏膜下层和外膜三层。黏膜表面为假复层纤毛柱状上皮，由纤毛细胞、杯状细胞

、基细胞
、刷细胞和弥散的神经细胞等组成。

细胞特性
：

1）细胞来源于人正常支气管组织
。

2)细胞鉴定

：广谱角蛋白（PCK）荧光染色为阳性
。

3)经鉴定细胞纯度高于 90%。

4)不含有  HIV-1
、 HBV、HCV
、支原体、、酵母和。

5)细胞生长方式

：上皮样，多角形细胞

，贴壁培养
。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 Delf 原代上皮细胞 培养体系 作为体外培养的培养基
。

实验报告
：

一
、分离与培养
：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s

，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液

，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min

，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min

；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品：

豚鼠白介素1受体拮抗剂(IL1Ra)ELISA 试剂盒

Rat angiotensin conveing enzyme (ACE) ELISA Kit 大鼠血管紧张素转化酶(ACE)检测试剂盒

Humanglomerularbasememembraneaibogy,GBMELISAKit 人抗肾小球基底膜抗体(GBM)检测试剂盒 进口分装

HumanCyclophosphamide,CTX检测试剂盒人环0酰胺(CTX)检测试剂盒

组织HCV(HEPATITISVIRUSC)病毒定量PCR扩增检测试剂盒20次

HumanPoliomyelitisVirus,PV-IgGELISAKit人脊髓灰质病毒IgG(PV-IgG)检测试剂盒

FGFR4重组食蟹猴 FGFR4 / FGF Receptor 4 蛋白  Protein

MDM2 (urine double minute 2 0.5mgMDM2 (urine double minute 2) 双微体2癌基因抗原

IL21R重组人 IL-21R / Interleukin-21 Receptor 蛋白 (His 标签) Protein

AK4 Protein Human 重组人 AK4 / Adenylate Kinase 4 / AK3L1 蛋白

DDR1 Protein Mouse 重组小鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 蛋白 (His & GST 标签)

MDM2 (urine double minute 2 0.5mgMDM2 (urine double minute 2) 双微体2癌基因抗原

AK4 Protein Human 重组人 AK4 / Adenylate Kinase 4 / AK3L1 蛋白

FGFR4重组食蟹猴 FGFR4 / FGF Receptor 4 蛋白  Protein

DDR1 Protein Mouse 重组小鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 蛋白 (His & GST 标签)

IL21R重组人 IL-21R / Interleukin-21 Receptor 蛋白 (His 标签) Protein

猪白介素18(IL-18)ELISA 试剂盒

Human ai Sa aibody (ai-Sa-Ab) ELISA Kit 人抗Sa抗体(ai-Sa-Ab)检测试剂盒

Porcineierleukin10,IL-10ELISAKit 猪白介素10(IL-10)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforAIRA(Humanai-insulieceptoraibody)ELISAKit人抗胰岛素受体抗体

血液尿酸含量直接(TPTZ)比色法定量检测试剂盒50次

MouseUlasensitivityThyroxine,u-T4ELISAKit小鼠高敏甲状腺素(u-T4)检测试剂盒

人支气管上皮细胞中文名称   方法   规格

大鼠髓过氧化物酶特异性抗粒细胞胞质抗体IgG(MPO-ANCAIgG)ELISAKit   ELISA. 

大鼠补体蛋白3(C3)ELISAKit   ELISA. 

大鼠(AZT)ELISAKit   ELISA.

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，

，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿


。