老哥俱乐部

细胞简介
：

直肠是自缘起向上 375px的一段大肠。直肠周围多脂肪、无纵带
，位于膀胱和生殖器官的背侧
。直肠横切面由内到外依次为：粘膜（上皮层
，固有层，粘膜肌层）
，粘膜下层，肌层
，外膜
。其中
，上皮细胞主要位于粘膜层的上皮层，为单层柱状上皮,含较多的杯状细胞。

细胞特性：

1）细胞来源于手术切除的正常直肠组织
。

2)细胞鉴定
：广谱角蛋白（PCK）荧光染色为阳性
。

3)经鉴定细胞纯度高于90%
。

4)不含有 HIV-1
、 HBV、HCV、支原体、、酵母和。

5)细胞生长方式：铺路石样
，多角形细胞，贴壁培养。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 delf原代上皮细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告：

一
、分离与培养
：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基

，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下

，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h

；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

马环磷酸鸟苷(cGMP)elisa分析检测试剂盒

胰岛素重组兔单克隆抗体

Insulin

膜粘连蛋白11抗体

Annexin A11

三碘甲状腺原(T3)elisa检测试剂盒免费代测

尿液一氧化氮合成酶总活性酶动力比色法定量检测试剂盒

小鼠骨成型蛋白受体1A(BMPR-1A)elisa检测试剂盒免费代测

大鼠白介素16(IL-16)elisa检测试剂盒免费代测

黑素皮质素2受体辅助蛋白2抗体

MRAP2

20号染色体开放阅读框141抗体

C20ORF141

脱氢还原酶14抗体  Anti-TM7SF2/DHCR14A

肾素/血管紧张素形成酶Ren1抗体  Anti-Renin

一氧化氮合成酶-1抗体（神经型）  Anti-nNos/NOS-1

细胞外基质底物反应蛋白1抗体  Anti-SPON1/F spondin

泛素蛋白连接酶E1抗体

UBE2E1

防御素β-110/β-defensin 110抗体

DEFB110

信号转导与转录激活因子1抗体  Anti-STAT1

钠钙交换蛋白3抗体  Anti-NCX3

磷酸化非受体型蛋白磷酸酶7抗体  Anti-phospho-PTPN7(Ser93)

转导β样蛋白1抗体  Anti-TBL1Y

大鼠肝X受体β(LXRβ)elisa分析检测试剂盒

大鼠β2微球蛋白(BMG/β2-MG)elisa生化检测试剂盒

BMG/β2-MG ELISA Kit

人核糖核酸抑止剂(RNH1/PRI/RNH)elisa生化检测试剂盒

人直肠上皮细胞RNH1/PRI/RNHELISAKit

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象

。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养


。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系

，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注

：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。