老哥俱乐部

细胞简介：

肠神经系统胶质细胞类似神经系统的星形胶质细胞，肠神经系统以网络结构广泛分布于浆膜下层、纵肌层、肌间层、环肌层
、深肌层、粘膜肌层和粘膜层。肠神经胶质主要位于肠肌间丛和粘膜下丛神经节，与神经节交织成团并与节间神经束相互连接。肠神经胶质不但对神经系统起支持作用，还在调控神经元生长
、发育、神经回路功能和细胞凋亡过程中起重要作用。

细胞特性：

1）组织来源于实验动物的正常肠组织
。

2)细胞鉴定：GFAP荧光染色为阳性
。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1
、 HBV、HCV
、支原体、、酵母和。

5)细胞生长方式：不规则细胞
，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 DELF 原代星形胶质细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2

、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养
；

5
、差速贴壁1h后
，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3

、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜

；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6


、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等

，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用

。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

兔子脂蛋脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA 试剂盒

Rat angiogenin (ANG) ELISA Kit 大鼠血管生长素(ANG)检测试剂盒

Humanadrenalcoexaibody,ACAELISAKit 人肾上腺皮质抗体(ACA)检测试剂盒 进口分装

HumancytokeratinHighMolecularWeight,CK-HMW检测试剂盒人高分子量细胞角蛋白(CK-HMW)检测试剂盒

组织HSV1(HERPESSIMPLX1)病毒定性检测试剂盒20次

Humanplateletbasicprotein,PBPELISAKit人血小板碱性蛋白(PBP/CXCL7)检测试剂盒

NA重组甲型流感 H1N1 (A/California/04/2009) 神经酶 (Neuraminidase / NA) (高活性) (His 标签) Protein

PS-1(NT 0.5mgPS-1(NT)
，Presennillin-1(S182) 早老素蛋白-1(抗原)

IL18RAP重组人 IL18RAP / IL1R7 蛋白 (His 标签) Protein

AKR1C4 Protein Human 重组人 AKR1C4 蛋白 (His 标签)

EPCAM Protein Human 重组人 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 蛋白

PS-1(NT 0.5mgPS-1(NT)
，Presennillin-1(S182) 早老素蛋白-1(抗原)

AKR1C4 Protein Human 重组人 AKR1C4 蛋白 (His 标签)

NA重组甲型流感 H1N1 (A/California/04/2009) 神经酶 (Neuraminidase / NA) (高活性) (His 标签) Protein

EPCAM Protein Human 重组人 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 蛋白

IL18RAP重组人 IL18RAP / IL1R7 蛋白 (His 标签) Protein

猪白介素4(IL-4)ELISA 试剂盒

Human ai IgA aibody (ai-IgA-Ab) ELISA Kit 人抗IgA抗体(ai-IgA-Ab)检测试剂盒

Porcineplasminogenactivatorinhibitor1,PAI-1ELISAKit 猪纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforALCAM(HumanActivatedLeukocyteCellAdhesionMolecule)ELISAKit人白细胞活化黏附因子

血液逆转录酶(REVERSEANSCREPTASE)活性荧光定量检测试剂盒20次

MouseVascuoarendothelialcellgrowthfactorreceptor,VEGFR-3/Flt-4ELISAKit小鼠血管内皮细胞生长因子受体-3(VEGFR-3/Flt-4)检测试剂盒

兔肠神经胶质细胞中文名称   方法   规格

人可溶性P选择素(sP-selectin)ELISAKit   ELISA. 

人基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISAKit   ELISA. 

人D(VD)ELISAKit   ELISA.