老哥俱乐部

细胞简介：

腹腔主动脉是人体的大动脉，直接延续于发自左心室的主动脉，胸腔主动脉
，沿脊柱左侧下行
，主要负责腹腔脏器和腹壁的血液供应。主动脉是由内膜、中层弹力层和外膜构成，三层紧密贴合在一起。其中，外膜是专门的支持组织
，外膜成纤维是外膜的主要成分，在血管炎症反应、血管重塑等方面发挥重要作用。

细胞特性：

1）组织来源于实验动物的正常主动脉组织。

2)细胞鉴定：波形蛋白(Vimentin)荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%
。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、、酵母和。

5)细胞生长方式
：长梭形细胞，不规则细胞，贴壁培养。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 DELF 原代 成纤维 细胞培养体系 作为体外培养的培养基
。

实验报告：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min

；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1

：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6

、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞

，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿

。

公司正在出售的产品

：

大鼠醛固酮合酶(ALDOS)elisa检测试剂盒

内着丝粒蛋白抗体

INCENP

锚蛋白重复结构域蛋白20A1抗体

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冰冻切片组织线粒体复合物I蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒

犬ELISAelisa检测试剂盒

球蛋白IgA试剂盒 R1

：45ml×1 R2
：15ml×1 浊度法

小鼠抗线粒体抗体（AMA）elisa检测试剂盒

MORC3蛋白抗体

MORC3

1号染色体开放阅读框87抗体

C1orf87

TWIST蛋白2抗体抗体  Anti-Twist2

血管生成素核糖核酸酶4抗体(肌性侧索硬化症蛋白)  Anti-RNASE4/Angiogenin

富含亮重复结构域蛋白6抗体  Anti-NALP6

极低密度脂蛋白受体抗体  Anti-VLDL Receptor

γ-原肌球蛋白/原肌球蛋白3抗体

Tropomyosin 3

ATP依赖RNA解旋酶DDX42抗体

DDX42

干燥症SSB/La抗体  Anti-SSB/La

胚胎干细胞关键蛋白190抗体(N端)  Anti-Oct-4B(OCT4B-190)NT

磷酸化蛋白激酶C亚性D型抗体  Anti-phospho-PKC delta (Ser645)

瞬时受体电位离子通道蛋白6抗体（M亚家族）  Anti-TRPM6

大鼠谷脱羧酶自身抗体IgG(GAD-Ab-IgG)elisa分析检测试剂盒

A型H1N1流感病毒神经酶抗体

Influenza A H1N1 Neuraminidase

锚蛋白重复结构域蛋白20A3抗体

兔腹腔主动脉外膜成纤维细胞ANKRD20A3