老哥俱乐部

细胞简介
：

结膜松弛症（ conjunctivochalasis
，CCh）是由于球结膜过度松弛和（或）下睑缘张力高


，造成松弛球结膜堆积在眼球与下睑缘、内外眦部之间，形成皱褶，引起眼表泪液分布异常，并伴有眼部不适如流泪
、干涩、异物感等症状的眼病。有研究表明结膜松弛症中结膜成纤维细胞的改变，影响细胞外基质成分的平衡状态和稳定性，可能是结膜松弛症发生的原因。

细胞特性
：

1）组织来源于实验动物的眼球。

2)细胞鉴定
：结蛋白（Desmin）或波形蛋白（Vimentin）荧光染色为阳性
。

3)经鉴定细胞纯度高于90%

。

4)不含有 HIV-1、 HBV
、HCV
、支原体、、酵母和。

5)细胞生长方式：长梭形细胞
，不规则细胞，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 DELF 原代 成纤维 细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告
：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2

、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min

，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等

，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态

，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

β-EPRELISAKit

鱼17-羟孕烯醇酮elisa分析检测试剂盒

Fish 17-hydroxypregnenolone ELISA kit

人鞭毛蛋白(flagellin)elisa分析检测试剂盒

HumanflagellinELISAKit

人体SOCS-3基因甲基化检测试剂盒

人Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)elisa分析检测试剂盒

大鼠ATP1B4蛋白(ATP1B4)elisa检测试剂盒

小鼠球蛋白G(IgG)elisa分析检测试剂盒

利什曼原虫表面蛋白酶(GP63)抗体

Leishmania Major Surface Protease

βA3/A1-crystallin蛋白抗体

beta Crystallin A3

溶质转运蛋白家族44成员1抗体  Anti-SLC44A1/CD92

乳腺癌和卵巢癌易感基因RAD51C抗体  Anti-RAD51C

丝/苏蛋白激酶Nek3抗体  Anti-NEK3

锌指蛋白23抗体  Anti-ZNF23

SKT蛋白抗体

SKT

中心体蛋白110抗体

CP110

突触相关蛋白29抗体  Anti-SNAP29

过氧化酶活化受体γ2抗体  Anti-PPAR gamma 2

丝裂原活化蛋白激酶p38α抗体  Anti-p38MAPK/MAPK14/p38Alpha

磷酸化羟化酶抗体  Anti-Phospho-TH (Ser31)

兔抗狗IgG H&L抗血清

elisa生化检测试剂盒

Deer Urateoxidase ELISA kit

人蛋白酶体(prosome,macropain)亚基,β型,2(PSMB2)elisa生化检测试剂盒

兔结膜成纤维细胞HumanPSMB2ELISAkit