老哥俱乐部

细胞简介：

结膜上皮是眼表的重要组成部分，是眼表的保护屏障
，在维持泪膜的稳定性、润滑眼表、维持正常视力和眼表上皮损伤修复中发挥重要作用。上世纪 90 年代，随着人们对眼表的深入研究，提出了结膜上皮干细胞的概念
，认为结膜上皮细胞的自我更新来自结膜上皮干细胞。

细胞特性
：

1）组织来源于实验动物的眼球
。

2)细胞鉴定：广谱角蛋白（PCK）荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%
。

4)不含有 HIV-1、 HBV
、HCV
、支原体
、、酵母和

。

5)细胞生长方式：扁平的椭圆形、梭形或不规则形，不规则细胞
，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 DELF 原代 上皮 细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告
：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）

，混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3

、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化

；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后

，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定
：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次

，每次10min
，按1

：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态

，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

CIAPELISAKit

大鼠γ分泌酶elisa分析检测试剂盒

Rat γ-secretase ELISA kit

人红细胞生成素(EPO)elisa分析检测试剂盒

EPOELISAKit

组蛋白H4-K12乙酰化检测试剂盒

人Ⅱ型胶原交联C端肽(CTX-Ⅱ)elisa分析检测试剂盒

大鼠Apelin(APLN)elisa分析检测试剂盒

小鼠膜联蛋白A1(ANXA1)elisa检测试剂盒

鱼17-羟孕烯醇酮elisa分析检测试剂盒

Fish 17-hydroxypregnenolone ELISA kit

人鞭毛蛋白(flagellin)elisa分析检测试剂盒

HumanflagellinELISAKit

植物细胞周期M期步（SYNCHRONY）处理试剂盒

大鼠组织因子(TF)前体 elisa检测试剂盒

细胞糖胺多糖（GAG）总含量阿尔新蓝（alcian blue）比色法定量检测试剂盒

小鼠白介素2受体β(IL2rb/CD122)elisa检测试剂盒

P53诱导细胞凋亡抑制蛋白抗体

NME5

第8号染色体开放阅读框78抗体

C8orf78

肿瘤坏死因子α诱导相互作用蛋白3抗体  Anti-TNFAIP3 interacting protein 3/ABIN3

磷酯酶Cγ1抗体  Anti-PLCG 1/PLC gamma 1

多聚合酶α抗体  Anti-PAPOA

抑制Hh信号通路蛋白SUFU抗体  Anti-SUFU/Suppressor of Fused

罗丹明标记的兔抗犬IgM抗体

鱼胰岛素样生长因子1(IGF-1)elisa生化检测试剂盒

IGF-1 ELISA Kit

人程序性细胞死亡因子4(PDCD4)elisa生化检测试剂盒

兔结膜上皮细胞HumanPDCD4ELISAKit