老哥俱乐部

细胞简介：

脑血管是由内膜、中层弹力层和外膜构成
，三层紧密贴合在一起。其中，外膜是专门的支持组织
，由结缔组织组成
，主要成分是成纤维细胞，其在血管炎症反应
、血管重塑等方面发挥重要作用
。

细胞特性：

1）组织来源于实验动物的正常脑组织。

2）细胞鉴定
：波形蛋白（Vimentin）荧光染色为阳性。

3）经鉴定细胞纯度高于90%

。

4）不含有 HIV-1、 HBV、HCV
、支原体
、
、酵母和。

5）细胞生长方式：长梭形细胞，不规则细胞，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 DELF 原代 成纤维 细胞培养体系 作为体外培养的培养基

。

实验报告
：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s
，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置

，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min

，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min
；

4

、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1

：150的比例稀释抗α-actin的二抗

， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品
：

蛋白样品沉淀法去内试剂盒

纯化微粒体磷脂酶D（Phospholipase D）总活性比色法定量检测试剂盒

人基质裂解蛋白/基质溶素(MAT)elisa分析检测试剂盒

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猪白介素1受体拮抗剂(IL1Ra)elisa分析检测试剂盒

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神经外营养蛋白4抗体 NXPH4

生物钟蛋白3抗体 PER-3

NIPAL2蛋白抗体 NIPAL2

p21激活激酶1抗体 PAK1

转录因子E2F-5抗体 E2F5

内膜抗体 SFRP4

含氧酸A转移酶1抗体 OXCT1

核糖体蛋白L19抗体 RPL19

锌指蛋白221抗体 ZNF221

锌指蛋白599抗体 ZNF599

表皮生长因子受体单克隆抗体 EGFR

叉头蛋白O1抗体 FOXO1A

DMRTD2蛋白抗体 DMRTD2

DYDC2蛋白抗体 DYDC2

磷酸化芳香胺N-乙酰化转移酶抗体 phospho-AANAT (Thr29)

磷酸化丝裂原活化蛋白激酶p38抗体 phospho-p38 MAPK (Thr180 + Tyr182)

小鼠丝裂原激活蛋白激酶激酶激酶激酶5(MAP4K5)elisa检测试剂盒

KCTD6蛋白抗体

KCTD6

细胞粘附分子4抗体

兔脑血管成纤维细胞Cell adhesion molecule 4