老哥俱乐部

细胞简介：

成纤维细胞属于由中胚层分化而来的间质细胞。由于这些细胞非常容易培养
，它们已经被广泛用于细胞和分子生物学研究中。一般而言，成纤维细胞能够分泌 I型和III型胶原等细胞外基质，并且研究表明不同器官中的成纤维细胞有显著的不同。伤口修复时，真皮成纤维细胞由可增殖，可迁移的表型变为有收缩性的，可重塑基质的表型
，同时
，它们会分泌大量的透明质酸来应对修复时的炎症反应。

细胞特性
：

1）组织来源于实验动物的正常皮肤组织。

2)细胞鉴定：纤维连接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、、酵母和
。

5)细胞生长方式：长梭形细胞
，不规则细胞
，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 DELF 原代 成纤维 细 胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告：

一

、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s

，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液

，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后

，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基

，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书

，了解细胞相关信息
，如细胞形态

、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化

，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清

。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态

，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品

：

植物原花青素测试盒

钾离子通道蛋白15抗体

KCNK15

Rho鸟甘酸转运蛋白抗体

ARHGEF11

组织MKK6激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）

人HSP60 IgM抗体elisa检测试剂盒

大鼠Toll样受体4(TLR4)elisa检测试剂盒免费代测

小鼠肉毒碱棕榈酰基转移酶1A(CPT1A)elisa检测试剂盒

肌球蛋白轻链7抗体

MYL7

3号染色体开放阅读框21抗体

C3orf21

跨膜蛋白158抗体  Anti-TMEM158

RNA结合蛋白片段Y染色体家族蛋白1抗体  Anti-RBMY1A1

核受体辅助抑制因子2抗体  Anti-NCoR2

可溶性载质转运蛋白SLC24A5抗体  Anti-SLC24A5

β淀粉样肽1-42单克隆抗体

beta-Amyloid (1-42)

DHTKD1蛋白抗体

DHTKD1

结肠抗原10抗体  Anti-SDCCAG10

谷受体2C抗体  Anti-NR2C/NMDAR2C

ras癌基因家族Rab3A--Rab3D抗体  Anti-Rab3A+Rab3B+Rab3C+Rab3D

粘液样脂肪肉瘤蛋白FUS1抗体  Anti-TLS/FUS

大鼠蛋白聚糖4(PRG4)elisa分析检测试剂盒

白三烯C4合成酶抗体

LTC4S

细胞色素P450 4X1抗体

兔皮肤成纤维细胞CYP4X1