老哥俱乐部

实验报告
：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基

，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基

，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min

，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h

；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介
：

肾间质是指肾脏血管和肾小管间的区域，为疏松的结缔组织构成，由间质细胞、网状纤维、少量弹力纤维、成纤维细胞核巨噬细胞等组成。

细胞特性：

1）组织来源于实验动物的正常肾组织
。

2)细胞鉴定：波形蛋白（Vimentin）荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1
、 HBV、HCV
、支原体、、酵母和。

5)细胞生长方式：长梭形细胞，不规则细胞，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 DELF 原代成纤维细胞培养体系 作为体外培养的培养基
。

公司正在出售的产品：

小鼠IgG Fc片段(IgGFcγ)检测试剂盒

Rat advanced glycation end products (AGEs) ELISA Kit 大鼠晚期糖基化终末产物(AGEs)检测试剂盒

HumahromboxaneB2,TX-B2ELISAKit 人血栓素B2(TXB2)检测试剂盒 进口分装

HumanCollagenaseTypeII检测试剂盒人胶原酶II(CollagenaseII)检测试剂盒

组织ABL1激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

HumaeceptorⅢfoheFcregionofimmunoglobulinG,FcγRⅢELISAKitGFc段受体Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)检测试剂盒

IL8重组人 IL-8 / CXCL8 蛋白 (aa 1-77, Fc 标签) Protein

Ⅹ(F10)重组蛋白 Recombinant Coagulation Factor X (F10)

EFNA4重组人 Ephrin-A4 / EFNA4 蛋白  Protein

ALOX5AP Protein Human 重组人 ALOX5AP / FLAP 蛋白 (His 标签)

HA Protein H7N9 重组甲型流感 H7N9 (A/Anhui/1/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 标签)

Ⅹ(F10)重组蛋白 Recombinant Coagulation Factor X (F10)

ALOX5AP Protein Human 重组人 ALOX5AP / FLAP 蛋白 (His 标签)

IL8重组人 IL-8 / CXCL8 蛋白 (aa 1-77, Fc 标签) Protein

HA Protein H7N9 重组甲型流感 H7N9 (A/Anhui/1/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 标签)

EFNA4重组人 Ephrin-A4 / EFNA4 蛋白  Protein

猪促生长激素释放激素(GHRH)ELISA 试剂盒

Human macrophage inflammatory protein 1 alpha (MIP-1 alpha /CCL3) ELISA Kit 人巨噬细胞性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)检测试剂盒

PorcineDexamethasone,DexELISAKit 猪(Dex)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforAlpha1Beta-GP(HumanAlpha1Betaglycoprotein)ELISAKit人α1β糖蛋白

血液0酸二酯酶3(PDE3)活性荧光定量检测试剂盒10次

MouseαN-acetylglucosaminidase,αNAGELISAKit小鼠αN已酰氨基葡糖苷酶(αNAG)检测试剂盒

兔肾间质成纤维细胞猪Ⅲ型胶原(ColⅢ)检测试剂盒     试剂盒   组装/原装

猪Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)检测试剂盒     试剂盒   组装/原装

植物玉米素核苷(ZR)检测试剂盒     试剂盒   组装/原装

植物玉米素(Z)检测试剂盒     试剂盒   组装/原装

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基

、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面

，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况

，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿

。不是1个T25瓶传2个10cm皿。