老哥俱乐部

实验报告：

一、分离与培养

：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2

、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次

，直至组织被消化
；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶

，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后

，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下

，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

肾上腺髓质位于肾上腺中心。肾上腺髓质细胞分泌两种
：肾上腺素和。肾上腺髓质细胞较大

，呈多边形，围绕血窦排列成团或不规则的索网状，细胞内含有细小颗粒。

细胞特性：

1）组织来源于实验动物的正常肾上腺组织。

2)细胞鉴定：神经特异性烯醇化酶（NSE）荧光染色为阳性
。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1
、 HBV
、HCV、支原体
、、酵母和。

5)细胞生长方式：梭形细胞，不规则细胞，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 DELF 原代 上皮 细 胞培养体系 作为体外培养的培养基

。

公司正在出售的产品：

豚鼠肾素(Renin)elisa检测试剂盒

人白介素5受体alpha(IL5RA)elisa检测试剂盒

细胞PKCη激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）

小鼠神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)elisa分析检测试剂盒

大鼠饥饿(GHRL)elisa分析检测试剂盒

动物多酚氧化酶（polyphenol oxidase
；PPO）活性比色法定量检测试剂盒

人s腺苷型半胱(SAH)elisa检测试剂盒免费代测

大鼠白蛋白启动子D位点结合蛋白(DBP)elisa检测试剂盒

小鼠髓细胞触发受体1(TREM1)elisa检测试剂盒

APC标记小鼠CD107b单克隆抗体 mouse CD107b/APC

BADH2(水稻)抗体 BADH2

跨膜蛋白132D抗体 TMEM132D

蛋白激酶SgK223抗体 PRAGMIN/Sgk223

X染色体开放阅读框31抗体 CXorf31

β淀粉样蛋白前体结合蛋白B-1抗体 APBB1 interacting protein 1

细胞毒性T细胞抗原-4（CD152）抗体 CTLA4

细胞角蛋白86抗体 KRT86

Kelch样蛋白17抗体 KLHL17

LEPREL1蛋白抗体 LEPREL1

驱动蛋白结合蛋白1抗体 TRAK1

热休克蛋白82抗体 HSC82

甘胺酸-N-酰基转移酶样1抗体 GLYATL1

干扰素诱导的三角形四肽重复蛋白1抗体 IFIT1

早老素蛋白-2抗体 presenilin 2

脂肪源性胰岛素增敏因子抗体 C1QTNF12

大鼠白介素15(IL15)elisa检测试剂盒

大鼠S100-A5蛋白(S100A5)elisa生化检测试剂盒

S100A5 ELISA kit

人胱天蛋白酶1(Casp-1)elisa生化检测试剂盒

兔肾上腺髓质细胞Casp-1ELISAKit

注意事项

：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿

。