老哥俱乐部

细胞简介
：

心脏壁主要由心肌构成，心房壁比心室壁薄。心肌的工作细胞包括心房肌和心室肌
。心肌细胞为短柱状
，一般只有一个细胞核，心肌细胞之间有闰盘结构。心房与心室的心肌层不直接相连，它们分别起止于心房和心室交界处的纤维支架，形成各自独立的肌性壁


，从而保证心房和心室各自进行独立的收缩舒张，以推动血液在心脏内的定向流动。临床研究表明
，在房颤患者心房肌细胞内
，发现存在有异常增高的细胞内钙蓄积
，并证实心肌细胞内钙超载在心律失常的发生中起着关键作用
。此外

，在房颤患者心房细胞内也发现有 CaMK Ⅱ的异常高表达。

细胞特性：

1）组织来源于实验动物的正常心脏组织。本细胞为终末分化细胞，增殖能力很弱，建议客户收到细胞后直接用于后续实验
，不要进行扩增培养。

2)细胞鉴定：肌球蛋白重链(Myosin heavy chain)荧光染色为阳性
。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1
、 HBV、HCV

、支原体
、、酵母和
。

5)细胞生长方式
：柱状细胞
，不规则细胞，贴壁培养
。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 DELF 原代心肌细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次

，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置

；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次

，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养

；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min

；

2
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次

，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系


。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题


，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠酶Ⅱ(CA2)检测试剂盒 ，英文名： CA2 ELISA Kit

Mouse glucocoicoid receptor alpha (GR- alpha) ELISA Kit 小鼠糖皮质激素受体α(GR-α)检测试剂盒

RatThyroidStimulatingHormone,TSHELISAKit 大鼠促甲状腺素(TSH)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforHLA-E(HumanleukocyteaigenE)ELISAKit人类白细胞抗原E

细胞PKG-II激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKitCRP大鼠C反应蛋白

FCGR1重组小鼠 CD64 / FCGR1 蛋白 (His & AVI 标签) Protein

ADCY1 peptide 腺苷酸环化酶1多肽抗原 0.5mgADCY1 peptide 腺苷酸环化酶1多肽抗原

SAA4重组人 SAA4 蛋白 (GST 标签) Protein

FCGR2B Protein Human 重组人 CD32b / FCGR2B 蛋白 (His & AVI 标签)

EGFR Protein Rat 重组大鼠 EGFR / HER1 / ErbB1 蛋白 (His 标签)

成纤维细胞生长因子9(FGF9)重组蛋白 Recombinant Fibroblast Growth Factor 9 (FGF9)

FCGR2B Protein Human 重组人 CD32b / FCGR2B 蛋白 (His & AVI 标签)

ENTPD1重组小鼠 CD39 / ENTPD1 蛋白 (His 标签) Protein

SELL Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CD62L / L-Selectin / SELL 蛋白

CD300LG重组人 CLM-9 / TREM4 / CD300LG 蛋白 Protein

小鼠肝细胞生长因子(HGF)ELISA 试剂盒

Human varicella zoster virus IgM (VZV-IgM) ELISA Kit 人水痘带状疱疹病毒IgM(VZV-IgM)检测试剂盒

HumanFibrinogen,FbgELISAKit 人血纤蛋白原(Fbg)检测试剂盒 进口分装

HumanAi-ypsin,AT检测试剂盒人抗(AT)检测试剂盒

植物氧化应激活性氧(ROS)比色法定量检测试剂盒(羟自由基)20次

humananGSlaminase2Cpolypeptide，TGM2ELISAKit人转酶2C多肽(TGM2)检测试剂盒

兔心房心肌细胞小鼠17羟皮质类固醇(17-OHCS)ELISAKit   ELISA. 

小鼠白介素1α(IL-1α)ELISAKit   ELISA. 

小鼠白介素2(IL-2)ELISAKit   ELISA. 

小鼠白介素4(IL-4)ELISAKit   ELISA.