老哥俱乐部

细胞简介：

输卵管是卵子运输
、储存、获能
，以及卵母细胞采取
、运送
、成熟、受精和早期胚胎发育的重要场所。输卵管与其他空腔器官相似，其管壁由内向外为粘膜层 (tunica mucosa)、肌层(muscular layer)和浆膜层所构成
。其中，肌层的结构和厚度因不同节段而有差异
，峡部肌层厚，管腔亦小

。

细胞特性：

1）组织来源于实验动物的正常输卵管组织
。

2)细胞鉴定


：平滑肌肌动蛋白（α-SMA）荧光染色为阳性
。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1
、 HBV、HCV
、支原体、、酵母和。

5)细胞生长方式
：梭形细胞，不规则细胞，贴壁培养
。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 DELF 原代 平滑肌 细 胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告
：

一、分离与培养
：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清

，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬

，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养
；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二

、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象

，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞

，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意

： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

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人蛋白酶激活复合体亚基2(PSME2)elisa分析检测试剂盒

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标准溶液

人α-黑色素细胞刺(α-MSH)elisa分析检测试剂盒

大鼠白介素1受体样1(IL1RL1)elisa检测试剂盒

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乙型肝炎病毒X抗原激活蛋白5抗体

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二磷酸葡萄糖神经酰胺葡萄糖基转移酶2抗体  Anti-UGCGL2

钙粘蛋白相关神经受体8抗体  Anti-PCDHA10/CNRN8

原钙粘蛋白γA4抗体  Anti-PCDHGA4

ATP-依赖的RNA解旋酶p47抗体  Anti-UAP56/BAT1

PE-Cy7标记的羊抗小鼠IgG H&L

猴白介素1a(IL1A)elisa生化检测试剂盒

IL1A ELISA kit

人多药耐药相关蛋白(MRP)elisa生化检测试剂盒

兔输卵管平滑肌细胞MRPELISAKit