老哥俱乐部

细胞简介：

在严重创伤应激急性期，边缘系统为应激应答敏感区，其功能和应激联系密切，杏仁核是边缘系统中重要的皮质下核团，在创伤后应激障碍发病中起重要作用。

海马是由于海马神经元凋亡，致体积减小
，杏仁核和海马的功能密切相关，海马的部分功能可由杏仁核的调节而实现。神经元是构成神经系统结构和功能的基本单位。神经元具有长突起，由细胞体和细胞突起构成
。

细胞特性
：

1）组织来源于实验动物的正常脑组织

。本细胞为终末分化细胞，增殖能力很弱，建议客户收到细胞后直接用于后续实验，不要进行扩增培养
。

2）细胞鉴定
：β-tubulin荧光染色为阳性。

3）经鉴定细胞纯度高于90%


。

4）不含有 HIV-1、 HBV
、HCV、支原体、、酵母和
。

5）细胞生长方式：不规则细胞，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 原代神经元细胞培养体系 作为体外培养的培养基
。

实验报告
：

一、分离与培养

：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清

，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后

，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3

、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4

、按1: 100的比例稀释α-actin一抗

，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗

， 37℃条件下放置1h

；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态

、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片

，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞

，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

兔白细胞介素-35(IL-35)检测试剂盒

Rat acetylcholine receptor aibody (AChRab) ELISA Kit 大鼠乙酰受体抗体(AChRab)检测试剂盒

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Humanmonoamineoxidase,MAOELISAKit人单胺氧化酶(MAO)检测试剂盒

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CAMK2B重组人 CAMK2B / CaMKII-beta 蛋白 (His & GST 标签) Protein

AMPK Protein Human 重组人 AMPK (G1/B1/A1) Heterotrimer 蛋白

SPARC Protein Mouse 重组小鼠 Osteonectin / SPARC 蛋白 (His 标签)

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猪(Dex)ELISA 试剂盒

Human arginase (Arg) ELISA Kit 人精酶(Arg)检测试剂盒

PorcineangiotensionⅡ,ANG-ⅡELISAKit 猪血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforAlpha2-AP(RabbitAlpha2-Aiplasmin)ELISAKit兔子α2抗纤溶酶

血液亮(leucine含量高效液相色谱法定量检测试剂盒20次

Mouseβ-hexosaminidaseA,β-HexAELISAKit小鼠β氨基己糖苷酶A(β-HexA)检测试剂盒

兔杏仁核神经元细胞猪白介素12(IL-12/P40)ELISAKit   ELISA.  

猪流行性腹泻病毒抗体(PEDV)ELISAKit   ELISA. 

猪传染性胃肠病毒抗体(TGEV)ELISAKit   ELISA. 

猪心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISAKit   ELISA.