老哥俱乐部

细胞简介

：

椎体终板软骨干细胞属于成体干细胞的一种，具有单克隆形成能力，以及成骨
、成脂与成软骨分化的重要特性
。

细胞特性：

1） 组织来源于实验动物的脊椎组织。

2) 细胞鉴定：CD44或CD90荧光染色为阳性。

3) 经鉴定细胞纯度高于90%

。

4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV

、支原体
、、酵母和。

5) 细胞生长方式：梭形，不规则细胞，贴壁培养

。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 Delf 原代成纤维细胞 培养体系 作为体外培养的培养基
。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4

、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品：

大鼠含血管性血友病因子A域蛋白1(vWA1)检测试剂盒 ，英文名： vWA1 ELISA Kit

Rat 6 keto prostaglandin (6-K-PG) ELISA Kit 大鼠6酮前列腺素(6-K-PG)检测试剂盒

RatsolubleToll-likereceptor2,sTLR-2ELISAKit 大鼠可溶性Toll样受体2(sTLR2)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforeNOS(MouseEndothelialniicoxidesyhase)ELISAKit小鼠内皮型合成酶

细胞0脂皮尔斯(Pearse)染色试剂盒50次

Ratleukemiainhibitoryfactor,LIFELISAKit大鼠白血病抑制因子(LIF)检测试剂盒

CNTF重组大鼠 CNTF / Ciliary Neurotrophic Factor 蛋白 Protein

HEV 戊型肝病毒(抗原 0.5mgHEV 戊型肝病毒(抗原)

KRAS重组人 K-Ras / K-Ras 蛋白 (His 标签) Protein

AMY2A Protein Human 重组人 AMY2A / Alpha-amylase 蛋白 (His 标签)

PRKCD Protein Mouse 重组小鼠 PKC delta / PRKCD 蛋白 (His & GST 标签)

HEV 戊型肝病毒(抗原 0.5mgHEV 戊型肝病毒(抗原)

AMY2A Protein Human 重组人 AMY2A / Alpha-amylase 蛋白 (His 标签)

CNTF重组大鼠 CNTF / Ciliary Neurotrophic Factor 蛋白 Protein

PRKCD Protein Mouse 重组小鼠 PKC delta / PRKCD 蛋白 (His & GST 标签)

KRAS重组人 K-Ras / K-Ras 蛋白 (His 标签) Protein

猪肝细胞生长因子(HGF)ELISA 试剂盒

Human Ureaplasma urealyticum aibody (UU-Ab) ELISA Kit 人解脲脲原体抗体(UU-Ab)检测试剂盒

PorcineEndothelialniicoxidesyhase3,eNOS-3ELISAKit 猪内皮型合成酶3(eNOS-3)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforAlpha-bungarotoxin,Alpha-BGTELISAKitα-银环蛇毒素

血液赖(lysine)含量化学比色法定量检测试剂盒20次

NudeMouseProteinPhosphatase,PPELISAKit裸鼠蛋酸酶(PP)检测试剂盒

兔椎体终板软骨干细胞猪白介素8(IL-8/CXCL8)ELISAKit   ELISA. 

猪白介素6(IL-6)ELISAKit   ELISA. 

猪白介素4(IL-4)ELISAKit   ELISA. 

猪白介素3(IL-3)ELISAKit   ELISA.

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例

、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1
：2传代 
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。