老哥俱乐部

细胞简介：

弹性软骨仅存在高等动物外耳廓、听道、会咽等处
。与其它软骨相比
，间质中含有大量交织成网的弹性纤维，成网状在软骨内排列，同时含有少量胶原纤维。目前，弹性软骨大多被用于修复人类残缺及畸形耳廓及其它美容修复。

细胞特性：

1）组织来源于实验动物的耳组织。

2)细胞鉴定：Ⅱ型胶原(Collagen Ⅱ)荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%


。

4)不含有 HIV-1、 HBV
、HCV、支原体、、酵母和
。

5)细胞生长方式
：梭状，不规则细胞

，贴壁培养

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 Delf原代软骨细胞培养体系 作为体外培养的培养基

。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2

、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s
，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液

，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片

，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

大鼠阿黑皮素原(POMC)检测试剂盒 ，英文名
： POMC ELISA Kit

Mouse compleme factor H (CFH) ELISA Kit 小鼠补体因子H(CFH)检测试剂盒

ELISA 小鼠肌肉生成抑制素(mouse Myostatin)  进口分装

CLIAKitforIL-1sRIELISAKit大鼠白介素1可溶性受体Ⅰ

通用型蜡质芽孢杆菌(Bacilluscereus)试剂盒20次

ELISAKitTpP大鼠血栓前体蛋白

HFE2重组食蟹猴 Hemojuvelin / HFE2 蛋白 (His 标签) Protein

IL-15(Interleukin-15 0.5mgIL-15(Interleukin-15) 白细胞介素-15抗原

BLMH重组人 BLMH / BLM hydrolase 蛋白 (His 标签) Protein

FUCA1 Protein Human 重组人 FUCA1 蛋白 (His 标签)

PARP1 Protein Mouse 重组小鼠 PARP-1 / PARP 蛋白 (His 标签)

IL-15(Interleukin-15 0.5mgIL-15(Interleukin-15) 白细胞介素-15抗原

FUCA1 Protein Human 重组人 FUCA1 蛋白 (His 标签)

HFE2重组食蟹猴 Hemojuvelin / HFE2 蛋白 (His 标签) Protein

PARP1 Protein Mouse 重组小鼠 PARP-1 / PARP 蛋白 (His 标签)

BLMH重组人 BLMH / BLM hydrolase 蛋白 (His 标签) Protein

小鼠补体片断5a(C5a)ELISA 试剂盒

Rat prostaglandin F2 alpha (PGF2 alpha) ELISA Kit 大鼠前列腺素F2α(PGF2α)检测试剂盒

HumanFMS-liketyrosinekinase3ligand,Flt-3LELISAKit 人FMS样酪激酶3配体(Flt-3L)检测试剂盒 进口分装

Humanbonealkalinephosphatase,BALP检测试剂盒人骨碱性0酸酶(BALP)检测试剂盒

植物总淀粉生物酶比色法定量检测试剂盒20次

HumanSomelysin-1,ST1ELISAKit人基质裂解素(ST1)检测试剂盒

小鼠耳软骨细胞兔子组织多肽抗原(TPA)ELISAKit   ELISA. 

兔子组胺(HIS)ELISAKit   ELISA. 

兔子转化生长因子β1(TGF-β1)ELISAKit   ELISA. 

兔子坏死因子α(TNF-α)ELISAKit   ELISA.